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大曲微生物的菌落计数法的详细步骤（包括药品的配制）
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 无菌检查 |
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2楼2012-06-11 09:38:04
3楼2012-06-11 10:18:54
chenliangqiang
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4楼2012-06-11 14:25:26
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【答案】应助回帖
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东方苏六: 金币+2, ★有帮助 2012-06-12 21:16:03
东方苏六: 金币+2, ★有帮助 2012-06-12 21:16:03
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微生物的菌落计数法应在洁净度100级的单向流空气区域内进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。 稀释液:pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液。 供试品制备方法如下：取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液至100ml，充分摇匀即可。 检查法： 1.平皿法：采用10倍递增稀释法对供试液进行逐步稀释，制备2～3个稀释级的供试液，每一稀释级每种培养基至少注2～3个平皿，注皿时，将1ml供试液慢慢全部注入平皿中，管内无残留液体，防止反流到吸管尖端部。阴性对照：用1支1ml吸管吸取稀释剂各1ml，分别注入4个平皿中。将预先配制好的霉菌、酵母菌计数用的玫瑰红钠琼脂培养基溶化，冷至约45℃，倾注上述各个平皿约15ml，以顺时针或逆时针方向快速旋转平皿，使供试液或稀释液与培养基混匀，放洁净工作台上待凝，凝固后于培养箱中倒置培养。 注意事项： 1.在作10倍递增稀释时，吸管插入第1级稀释液内不低于液面2.5cm，反复吸吹约10次。吸液时，应先吸至高于吸管上部刻度少许，然后提起吸管，贴于试管内壁，调整液面至刻度，吸管移至第2级稀释管的内壁近液面处（勿接触液面），缓慢地放出全部供试液，然后换另一吸管进行下一步稀释。 2.从低稀释级到高稀释级操作时，必须换吸管；从高稀释级到低稀释级操作时，可以使用同一支吸管。 3.供试液稀释及注皿时应振摇后取均匀供试液，以免造成实验误差。 方法二：薄膜过滤法： 1.取相当于每张滤膜含1g或1ml供试品的供试液直接过滤，或加至适量稀释剂中，混匀，过滤。若供试品每1g或1ml所含菌数较多时，可取适宜稀释级的供试液1ml，过滤。用pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液或其他适宜的冲洗液冲洗滤膜，冲洗方法和冲洗量要验证。冲洗后取出滤膜，菌面朝上贴于玫瑰红钠琼脂培养基平板上，倒置培养。至少制备一张滤膜。每片滤膜上的菌落数应不多于100个。如菌落数超过100个，不便计数时，可取高稀释级的供试液同法操作，点计滤膜上的菌落数。 2.阴性对照试验:取试验用的稀释液1ml，照上述滤膜过滤法操作，作为阴性对照。阴性对照不得有菌生长。 注意事项： 1.采用滤膜过滤法，滤膜孔径应不大于0.45μm，直径一般为50mm，使用时，保证滤膜在过滤前后的完整性。若采用其他直径的滤膜，冲洗量应进行相应的调整。 2.水溶性供试液过滤前先将少量的冲洗液过滤以湿润滤膜。油类供试品，其滤膜和过滤器在使用前应充分干燥。为发挥滤膜的最大过滤效率，应注意保持供试品溶液及冲洗液覆盖整个滤膜表面。供试液经薄膜过滤后，若需要用冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量为100ml。每片滤膜的总过滤量不宜过大，以避免滤膜上的微生物受损伤。 培养：23～28℃培养5～7天。 玫瑰红钠琼脂培养基：蛋白胨5.0g,磷酸二氢钾1.0g,玫瑰红钠0.0133g,硫酸镁0.5g,葡萄糖10.0g,琼脂14.0g. |
7楼2012-06-12 13:02:20
