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hubohuna

新虫 (初入文坛)

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[求助] 双酶切，切不下来

小弟第一次够载体，片段大小大约一千三，酶切位点为hind111&noc1（没有设置保护碱基），之前切t载体，切载体，切片段都是成功的，然后将目的片段和载体连接导入大肠杆菌后，涂板子，挑菌落，做菌落pcr，显示有带，做质粒pcr验证显示也有目的带（可不可以说，片段是连到质粒上去了的？）但是酶切没结果，单酶切和双酶切条带基本一样。这个问题困扰我近半个月了，反反复复做了好几次都一样。
ps.质粒是用安比奥的试剂盒提的。
求大神帮忙指点，感激不尽！

[ Last edited by 1949stone on 2012-6-9 at 13:02 ]

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1楼 2012-06-08 18:41:10

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jimjohntall

金虫 (著名写手)

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专业: 微生物生理与生物化学

【答案】应助回帖

引用回帖:

5楼: Originally posted by hubohuna at 2012-06-09 08:45:17
有做对照，双酶切和单酶切条带是一样的，片段上是没有酶切位点的，其实我想知道我的这个结果是不是可以说片段是连到载体上去了，只是酶切没切下来，毕竟菌落和质粒pcr都有目的条带。...

嗯用质粒做PCR如果能P出目的条带来，是可以认为连上去的。你觉得不可靠的话可以测一下序列就可以了