24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2364  |  回复: 19
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

hubohuna

新虫 (初入文坛)

[求助] 双酶切,切不下来

小弟第一次够载体,片段大小大约一千三,酶切位点为hind111&noc1(没有设置保护碱基),之前切t载体,切载体,切片段都是成功的,然后将目的片段和载体连接导入大肠杆菌后,涂板子,挑菌落,做菌落pcr,显示有带,做质粒pcr验证显示也有目的带(可不可以说,片段是连到质粒上去了的?)但是酶切没结果,单酶切和双酶切条带基本一样。这个问题困扰我近半个月了,反反复复做了好几次都一样。
ps.质粒是用安比奥的试剂盒提的。
求大神帮忙指点,感激不尽!

[ Last edited by 1949stone on 2012-6-9 at 13:02 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jimjohntall

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by hubohuna at 2012-06-09 08:45:17
有做对照,双酶切和单酶切条带是一样的,片段上是没有酶切位点的,其实我想知道我的这个结果是不是可以说片段是连到载体上去了,只是酶切没切下来,毕竟菌落和质粒pcr都有目的条带。...

嗯用质粒做PCR如果能P出目的条带来,是可以认为连上去的。你觉得不可靠的话可以测一下序列就可以了
8楼2012-06-09 12:29:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答

hubohuna

新虫 (初入文坛)

质粒大概5kbp的样子
2楼2012-06-08 18:44:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

swky

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

3楼2012-06-08 18:51:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jimjohntall

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
1949stone: 回帖置顶 2012-06-08 21:50:58
1949stone: 金币+1, 鼓励 2012-06-08 21:51:06
有没有作对照,提取质粒做酶切双切如果得不到目的片段,你可以试试单酶切,看一下大小的。你选的酶,酶切位点在目的片段中有没有,是不是唯一的。
4楼2012-06-08 19:32:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 调剂 +11 2261744733 2026-04-08 11/550 2026-04-08 23:10 by 宁静我心
[考研] 278求调剂 +21 范婷娜 2026-04-07 24/1200 2026-04-08 22:48 by may_新宇
[考研] 331求调剂 +5 luoxin0706. 2026-04-08 5/250 2026-04-08 22:15 by zhouyuwinner
[考研] 一志愿211,0703化学305分求调剂 +20 严西西戏 2026-04-06 26/1300 2026-04-08 22:12 by 凯凯要变帅
[考研] 材料工程085601,270求调剂 +22 @ASDF1234 2026-04-08 23/1150 2026-04-08 22:03 by zhouyuwinner
[考博] 博士申请 +3 IQwQl 2026-04-05 3/150 2026-04-07 20:31 by greychen00
[考研] 287求调剂 +3 通信学硕081000 2026-04-03 4/200 2026-04-06 21:03 by going home
[考研] 求调剂 +10 chenxrlkx 2026-04-05 10/500 2026-04-06 11:31 by 猪会飞
[考研] 一志愿 江南大学 085602 化工专硕 338分求调剂 +15 路痴小琪 2026-04-05 15/750 2026-04-06 09:27 by cql1109
[考研] 302分 085601求调剂推荐 +11 zyx上岸! 2026-04-05 11/550 2026-04-05 22:13 by dongzh2009
[考研] 348求调剂 +6 wukira 2026-04-04 6/300 2026-04-05 18:11 by 猪会飞
[考研] 11408,335分,本科211,求调剂,可转专业 +5 鳄梨大鳄鱼 2026-04-03 5/250 2026-04-04 22:49 by chongya
[考研] 求调剂 +3 ffyyu 2026-04-02 3/150 2026-04-04 19:03 by 蓝云思雨
[考研] 293求调剂 +5 末未mm 2026-04-02 6/300 2026-04-03 15:20 by 王保杰33
[考研] 330求调剂 +3 白神呜呼呼 2026-04-02 3/150 2026-04-03 10:15 by 蓝云思雨
[考研] 专硕 351 086100 也是考的材科基 本科也是材料 +8 202451007219 2026-04-02 8/400 2026-04-03 09:50 by 蓝云思雨
[考研] 338求调剂,一志愿能源动力,外语是日语203 +5 zzz,,r 2026-04-02 5/250 2026-04-03 09:45 by 蓝云思雨
[考研] 295求调剂 +7 愿旅途永远坦然 2026-04-02 7/350 2026-04-03 08:22 by fangshan711
[考研] 302求调剂 +9 zyx上岸! 2026-04-02 9/450 2026-04-02 23:07 by 马儿快快地跑
[考研] 298求B区调剂 +4 zzz,,r 2026-04-02 5/250 2026-04-02 12:17 by 土木硕士招生
信息提示
请填处理意见