应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 质粒转化完后怎么做
51/1返回列表
查看: 2476  |  回复: 6
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

rongren

木虫 (小有名气)

[求助] 质粒转化完后怎么做

质粒转化完后该怎么做
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2012-05-31 09:29:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

draco1987

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
转化，复苏，筛选平板培养，挑菌，菌液PCR验证，扩培。之后的步骤视用途而定。因为不知道具体的，只能大致给个步骤。楼上其实说的也都差不多，但是切记，挑菌后一定要鉴定阳性克隆（一般是做菌液PCR），筛选培养基只是初筛，有比较多的假阳性，不能完全信的。
赞一下 回复此楼
6楼2012-06-01 09:52:47
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
看天: 金币+2, 鼓励回答 2012-05-31 21:13:35
转化之后摇2小时，就应该去涂平板了，涂完平板过夜之后，你该挑单菌落去做小剂量表达，顺便留菌种。小剂量表达的话就应该做大剂量了。最后收菌破碎，纯化。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2012-05-31 11:05:38
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

37号童鞋

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
看天: 金币+4, 鼓励 新人 2012-05-31 21:13:49
不知道楼主是做哪方面的
我们一般转化完质粒，大肠杆菌45min~1h37度220rpm
涂相应抗性的板
37度过夜
第二天挑单克隆
如果是要提蛋白
小摇过夜后大摇
我们用高压破碎菌液
收集蛋白并提纯
赞一下 回复此楼
3楼2012-05-31 11:13:08
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bingdong05

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
看天: 金币+4, 鼓励交流 2012-05-31 21:13:58
那大肠杆菌来说：1）转化完毕后加入900微升的lb，37度，150rpm/min摇床1h左右，然后涂布相应抗生素平板，37度过夜，第二天看转化子生长情况；2）挑转化子到含有相应抗生素的lb液体培养基，37度过夜培养；3）提取质粒，做酶切或是pcr验证
赞一下 回复此楼
4楼2012-05-31 13:56:27
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭