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szp0401

木虫 (正式写手)

[求助] 磁珠 生物素 PCR 已有1人参与

引物用生物素修饰了 可以吸附到磁珠上面,但PCR之后的PCR产物却吸不到上面或者说吸附量很小,为什么
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longrna

新虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by szp0401 at 2012-06-11 12:07:49
磁珠是promage的磁珠,生物素与磁珠之间的吸附是在PCR之后...

即生物素是跟随PCR反应的,磁珠没有是吧?
但是生物素(引物)经过了PCR后其性质是否已改变,由原来的能跟磁珠吸附变成不成吸附呢?不懂....
伟大航线....
7楼2012-06-12 11:45:24
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yingyangyang

木虫 (正式写手)


★ ★ ★
西瓜: 金币+3, 鼓励热心交流~直接“快速回复主题”是没有传图片的功能,需点击“回复帖子”,在新的页面里就有传图片、附件的功能了。 2012-05-31 09:32:11
你做的是文库构建吗?  是不是RNa-Seq?     我有这个过程图,但是这里发不了图片给你看!  只能文字描述下,但是怕描述不清楚呢!
带生物素的引物与DNA片段一端连接,加5’端接头与DNA片段的另一端连接,然后反转录,带生物素的引物开始按照DNA模板延伸;然后PCR以带生物素的cDAN为模板扩增出来的片段不会带有生物素。
2楼2012-05-30 22:08:41
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szp0401

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yingyangyang at 2012-05-30 22:08:41
你做的是文库构建吗?  是不是RNa-Seq?     我有这个过程图,但是这里发不了图片给你看!  只能文字描述下,但是怕描述不清楚呢!
带生物素的引物与DNA片段一端连接,加5’端接头与DNA片段的另一端连接,然后反转录 ...

谢谢你,我不是构建文库,我只制备单链DNA
3楼2012-05-31 18:08:16
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longrna

新虫 (正式写手)

磁珠是什么磁珠?
PCR过程有高温变性,生物素与磁珠之前的吸附已经被破坏了吧
伟大航线....
5楼2012-06-09 23:48:42
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