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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 磁珠 生物素 PCR
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szp0401

木虫 (正式写手)

[求助] 磁珠 生物素 PCR 已有1人参与

引物用生物素修饰了 可以吸附到磁珠上面，但PCR之后的PCR产物却吸不到上面或者说吸附量很小，为什么
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1楼 2012-05-30 17:02:07
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yingyangyang

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
西瓜: 金币+3, 鼓励热心交流~直接“快速回复主题”是没有传图片的功能，需点击“回复帖子”，在新的页面里就有传图片、附件的功能了。 2012-05-31 09:32:11
你做的是文库构建吗？  是不是RNa-Seq?     我有这个过程图，但是这里发不了图片给你看！  只能文字描述下，但是怕描述不清楚呢！
带生物素的引物与DNA片段一端连接，加5’端接头与DNA片段的另一端连接，然后反转录，带生物素的引物开始按照DNA模板延伸；然后PCR以带生物素的cDAN为模板扩增出来的片段不会带有生物素。
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2楼2012-05-30 22:08:41
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szp0401

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yingyangyang at 2012-05-30 22:08:41
你做的是文库构建吗？  是不是RNa-Seq?     我有这个过程图，但是这里发不了图片给你看！  只能文字描述下，但是怕描述不清楚呢！
带生物素的引物与DNA片段一端连接，加5’端接头与DNA片段的另一端连接，然后反转录 ...

谢谢你，我不是构建文库，我只制备单链DNA
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3楼2012-05-31 18:08:16
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szp0401

木虫 (正式写手)
怎么没人回复啊
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4楼2012-06-09 17:22:44
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longrna

新虫 (正式写手)
磁珠是什么磁珠？
PCR过程有高温变性，生物素与磁珠之前的吸附已经被破坏了吧
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伟大航线....
5楼2012-06-09 23:48:42
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szp0401

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by longrna at 2012-06-09 23:48:42
磁珠是什么磁珠？
PCR过程有高温变性，生物素与磁珠之前的吸附已经被破坏了吧

磁珠是promage的磁珠，生物素与磁珠之间的吸附是在PCR之后
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6楼2012-06-11 12:07:49
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longrna

新虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by szp0401 at 2012-06-11 12:07:49
磁珠是promage的磁珠，生物素与磁珠之间的吸附是在PCR之后...

即生物素是跟随PCR反应的，磁珠没有是吧？
但是生物素（引物）经过了PCR后其性质是否已改变，由原来的能跟磁珠吸附变成不成吸附呢？不懂....
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伟大航线....
7楼2012-06-12 11:45:24
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szp0401

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by longrna at 2012-06-12 11:45:24
即生物素是跟随PCR反应的，磁珠没有是吧？
但是生物素（引物）经过了PCR后其性质是否已改变，由原来的能跟磁珠吸附变成不成吸附呢？不懂.......

这个不会，如果性质会发生改变的话，那引物的生物素修饰岂不是没什么作用，而且有多篇文献都是采用引物生物素修饰的方法
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8楼2012-06-12 13:22:34
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gungunak47

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以试试 惠尔纳米科技有限公司的磁珠  我们用过的  效果比PROMEGA好很多
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9楼2012-06-13 17:05:59
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szp0401

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by gungunak47 at 2012-06-13 17:05:59
可以试试 惠尔纳米科技有限公司的磁珠  我们用过的  效果比PROMEGA好很多

谢谢  应该不是磁珠的问题
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10楼2012-06-14 12:24:30
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