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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 云南红土微生物总DNA PCR 求指点
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上帝也很忙

金虫 (初入文坛)

[求助] 云南红土微生物总DNA PCR 求指点 已有3人参与

云南红土提取总DNA含量少得可怜，好不容易积攒够量，10个土样PCR后跑电泳只有3个土样有条带，求指点
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1楼 2014-05-15 15:28:53
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

air042

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2014-05-16 08:44:58
其实不需要用积攒的方法提高模板的量，很多时候做环境样本，模板电泳都跑不出来，但是做PCR仍然很easy。你做的是哪个片段的PCR?考虑下模板杂质对PCR的影响。找一些通用引物PCR试试，看看是不是模板的问题！换PCRmix试试，实在不行换用Gold Taq。或者把模板纯化后再PCR。
环境微生物学专业的？你是昆工的吗？
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4楼2014-05-16 08:30:46
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air042

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 上帝也很忙 at 2014-05-16 10:37:12
用的是通用引物27F和1492R，红土腐殖质含量蛮高的，请问有好的方法去除腐殖质吗...

用磁珠法的试剂盒
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8楼2014-05-17 10:38:21
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yuren2009

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
上帝也很忙(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-18 19:58:23
目的DNA量太低试试二次PCR
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学习使你立于不败之地
12楼2014-05-18 11:21:17
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普通回帖

吹着泡泡的夏

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-05-16 08:44:54
还是dna量的问题，想办法提高dna的含量
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走着走着就长大了
2楼2014-05-15 17:20:46
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上帝也很忙

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 吹着泡泡的夏 at 2014-05-15 17:20:46
还是dna量的问题，想办法提高dna的含量

量已经足够了，用原液跑电泳有很粗的条带
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3楼2014-05-15 21:47:24
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吹着泡泡的夏

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 上帝也很忙 at 2014-05-15 21:47:24
量已经足够了，用原液跑电泳有很粗的条带...

可是按道理说应该都有条带才对
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走着走着就长大了
5楼2014-05-16 09:30:04
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上帝也很忙

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by air042 at 2014-05-16 08:30:46
其实不需要用积攒的方法提高模板的量，很多时候做环境样本，模板电泳都跑不出来，但是做PCR仍然很easy。你做的是哪个片段的PCR?考虑下模板杂质对PCR的影响。找一些通用引物PCR试试，看看是不是模板的问题！换PCRmix ...

用的是通用引物27F和1492R，红土腐殖质含量蛮高的，请问有好的方法去除腐殖质吗
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6楼2014-05-16 10:37:12
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_深海渔_

金虫 (小有名气)
我是来顶的

[ 发自小木虫客户端 ]
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7楼2014-05-16 17:35:26
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上帝也很忙

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by air042 at 2014-05-17 10:38:21
用磁珠法的试剂盒...

我们实验室都是人工提DNA，你说的试剂盒貌似木有啊
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9楼2014-05-18 10:15:12
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上帝也很忙

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by air042 at 2014-05-17 10:38:21
用磁珠法的试剂盒...

我们实验室是人工提DNA，那个试剂盒貌似没有
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10楼2014-05-18 10:16:02
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