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神经再生

铁杆木虫 (著名写手)

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[交流] 有没有人用Western blot在做17kDa蛋白质,求经验！！！

有没有人用Western blot在做17kDa左右的蛋白质分子
现在知道分离胶需要使用15%，转膜之后丽春红染色只能看到大分子条带，小分子的看不到。
求解：
电泳时的电压，时间应该用多少的？？？
转膜的条件又如何，比如电压、时间？？？注：本实验室使用湿转还有没有其他的注意事情，比如蛋白提取过程的问题，有人说小分子的蛋白比较容易降解。。。

[ Last edited by 神经再生 on 2012-6-4 at 09:50 ]

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1楼2012-05-30 09:34:23

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神经再生

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引用回帖:

9楼: Originally posted by geek23 at 2012-05-31 17:46:38
100v 2小时长了点吧
我跑survivin 16KD 转膜 100v就转一个小时同时加冰转控制电流不要超过0.3A 如果其他大分子量的蛋白在很有可能是穿膜了小分子的跑过去了...

100v 1h条件下 42kD 的内参 actin 可不可以转过去因为我想在同一张膜上做两个抗体，蛋白量比较少