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WB的上样问题 已有2人参与
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1.我的方法：上样时候，各样品的蛋白量是一定的，因此各样品的体积肯定不一样，然后各样品加上样缓冲液，使各样品的体积保持一致。 但是这样一来的话，加在每个样中的loading buffer的量就不一致了，会不会有影响？ 2.还有，我买的是5*loading buffer.应该怎么用？师兄说是让我先把其稀释到1*，然后上样的时候补加到各样品中去，使各样品体积保持一致。这样做对不？ 3.有文章说是上样的时候样品和2*的loading buffer 按1:1体积混合。要是这样的话，岂不是总体积不一致了？ [ Last edited by gigiloveu on 2012-5-29 at 09:18 ] |
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【答案】应助回帖
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| 我们做的时候也是按照二楼的方法做的，5Xloading是要稀释，本来提取后的样品是不含loading的，是定量之后才根据你提取的蛋白量加的5Xloading，用样品将loading稀释成1X，上样的时候，如果各孔的样品体积量不一样，是要加入适量的1Xloading将体积补足的，体积不一样，有可能会使电泳后的条带歪斜，得不到理想的结果。置于第三条，你说的2X的，你仔细看看文章里是不是用的就是2Xloading ，没有用1Xloading |
3楼2012-05-29 13:08:47
hongqifei
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