| 查看: 7215 | 回复: 7 | ||
[求助]
WB的上样问题 已有2人参与
|
||
|
1.我的方法：上样时候，各样品的蛋白量是一定的，因此各样品的体积肯定不一样，然后各样品加上样缓冲液，使各样品的体积保持一致。 但是这样一来的话，加在每个样中的loading buffer的量就不一致了，会不会有影响？ 2.还有，我买的是5*loading buffer.应该怎么用？师兄说是让我先把其稀释到1*，然后上样的时候补加到各样品中去，使各样品体积保持一致。这样做对不？ 3.有文章说是上样的时候样品和2*的loading buffer 按1:1体积混合。要是这样的话，岂不是总体积不一致了？ [ Last edited by gigiloveu on 2012-5-29 at 09:18 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
实验室接单子
已经有6人回复
-
假如你的研究生提出不合理要求
已经有11人回复
-
全日制（定向）博士
已经有5人回复
-
萌生出自己或许不适合搞科研的想法，现在跑or等等看？
已经有4人回复
-
Materials Today Chemistry审稿周期
已经有4人回复
-
参与限项
已经有3人回复
-
对氯苯硼酸纯化
已经有3人回复
-
求助:我三月中下旬出站，青基依托单位怎么办？
已经有12人回复
-
所感
已经有4人回复
-
要不要辞职读博？
已经有7人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于western blot的小问题
已经有12人回复
- WB电泳时，蛋白样品堵在上样口
已经有14人回复
- Western Blot实验的蛋白条带都连在一起
已经有37人回复
- WB技术，条带弥散，拖尾，泳道很亮。
已经有3人回复
- 请教western blot 时蛋白稀释液情况
已经有4人回复
- WB实验，胶片问题
已经有10人回复
- 这是我的page胶的图，有些奇怪，请大家给点意见，分析下，怎么会跑成这样
已经有11人回复
- 【转】我在SDS-PAGE中所犯的错误，欢迎补充！
已经有33人回复
- WB检测磷酸化蛋白
已经有41人回复
- western blot时marker问题求助
已经有18人回复
- WB 有内参 么有目得。why ?
已经有4人回复
- WB定量问题
已经有13人回复
- WB结果不理想，呼唤帮助
已经有20人回复
- 【求助】WB中，核蛋白内参和总蛋白内参的问题
已经有12人回复
- 【求助/交流】western blot
已经有35人回复
- 【求助/交流】小鼠单抗做WB的问题
已经有11人回复
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励发帖帮助解答问题。 2012-05-29 20:08:35
amisking: 回帖置顶 2012-05-29 20:08:36
yqbter: 金币+5, 鼓励新虫发帖应助！ 2012-05-30 08:10:20
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励发帖帮助解答问题。 2012-05-29 20:08:35
amisking: 回帖置顶 2012-05-29 20:08:36
yqbter: 金币+5, 鼓励新虫发帖应助！ 2012-05-30 08:10:20
| 我们做的时候也是按照二楼的方法做的，5Xloading是要稀释，本来提取后的样品是不含loading的，是定量之后才根据你提取的蛋白量加的5Xloading，用样品将loading稀释成1X，上样的时候，如果各孔的样品体积量不一样，是要加入适量的1Xloading将体积补足的，体积不一样，有可能会使电泳后的条带歪斜，得不到理想的结果。置于第三条，你说的2X的，你仔细看看文章里是不是用的就是2Xloading ，没有用1Xloading |
3楼2012-05-29 13:08:47
hongqifei
木虫 (小有名气)
- 应助: 47 (小学生)
- 金币: 2412.9
- 红花: 4
- 帖子: 261
- 在线: 134.5小时
- 虫号: 582655
- 注册: 2008-07-25
- 性别: GG
- 专业: 人类遗传学
2楼2012-05-29 09:19:37
cfynocry
银虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 381.7
- 散金: 1
- 帖子: 151
- 在线: 26.7小时
- 虫号: 1436077
- 注册: 2011-10-10
- 专业: 中药抗炎与免疫药理
4楼2012-05-29 20:57:01
jasonwyb123
金虫 (小有名气)
- 应助: 59 (初中生)
- 金币: 1229.6
- 红花: 1
- 帖子: 205
- 在线: 29.5小时
- 虫号: 1751129
- 注册: 2012-04-12
- 专业: 蛋白质组学
5楼2012-05-30 09:04:43
jasonwyb123
金虫 (小有名气)
- 应助: 59 (初中生)
- 金币: 1229.6
- 红花: 1
- 帖子: 205
- 在线: 29.5小时
- 虫号: 1751129
- 注册: 2012-04-12
- 专业: 蛋白质组学
6楼2012-06-01 09:07:36
7楼2014-03-10 09:19:05
jurkat.1640
至尊木虫 (文坛精英)
- BioEPI: 2
- 应助: 905 (博后)
- 金币: 16552.4
- 散金: 1654
- 红花: 120
- 沙发: 41
- 帖子: 14463
- 在线: 2171.8小时
- 虫号: 514340
- 注册: 2008-02-28
- 性别: GG
- 专业: 病毒学
8楼2014-03-11 15:56:44