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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 做RACE对RNA质量的要求
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)

[求助] 做RACE对RNA质量的要求

最近在做RACE ，想向各位大侠请教个问题：3‘RACE或是5’RACE是不是对RNA的质量要求特别高？如果质量不高的话会有什么结果，是扩不出目的条带？或者是扩初条带但非特异扩增的几率大？       最近做的3‘RACE，出来条带感觉是非特异性扩增，不知是引物设计的不对，还是提取的RNA质量不高？
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勤能补拙
1楼 2012-05-20 18:44:51
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wcwluwei

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-05-21 13:37:03
本帖内容被屏蔽
2楼2012-05-20 20:43:24
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wcwluwei at 2012-05-20 20:43:24:
做RACE的RNA质量要求非常高，当然这是做好RACE必须的，如果质量好的话，才能确保你要的序列在里面而且结构完整，另外，OD的比值应该在标准的范围内，一般都要在2.0左右，浓度2000以上，这样如果操作上没什么问题的 ...

哦，感谢了这位仁兄。我们一直都用宝生物的3‘RACE试剂盒，话说用的是3'RACE  adaptor。我这个可能还真是RNA质量的问题。再试试吧！  谢谢了！！
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勤能补拙
3楼2012-05-20 20:59:29
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dayulee

木虫 (正式写手)

愚木虫

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-22 13:46:01
我也是用的宝生物的3试剂盒，还是可以一次就搞定了。我觉得很大程度上是你的引物问题。对RNA 要求是比较高的，不过我觉得只要你提出来RNA两条带比较量做3‘是没问题的。
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好好学习，天天向上
4楼2012-05-22 09:36:41
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