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madengyu

禁虫 (小有名气)

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叶倾意

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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西瓜: 金币+3, Good! 2012-05-18 18:52:47
[1]你要排除是试剂的问题,即你的酶是自己用,还是一堆人在用,要是后者,你还是重新买了,再做吧
[2]大连宝生的是TAKARA的酶么?NOT1 确实有的时候比较难切,你可以换FERMANTAS或者NEB的酶试试
[3]酶切时间有点短,我一般至少切3hr,NOT1很傲娇的。。。
[4]泡电泳的时候,除了marker,上酶切前的质粒,做阴阳性对比,才能看出所有问题。。。
自知者智 自胜者勇 自暴者弃 自强者成
9楼2012-05-18 16:49:10
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张宏宇123

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


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小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-18 15:20:43
你的质粒是多大的,酶切后应该是多大的片段?
还有就是用HindIII和NotI双酶切是0.5K+BSA,应该是1ul的K Buffer和2ul的BSA。
未来不是梦
2楼2012-05-17 17:56:11
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madengyu

禁虫 (小有名气)

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3楼2012-05-17 19:51:03
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酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-18 15:20:53
我建议你分别用HindIII和NotI做单酶切看看,是哪一个酶的酶切有问题,可能是酶失活,或者酶切条件不合适导致某一个酶的酶切失败。当然,最简单的办法是直接送质粒进行序列分析,就知道是否由序列突变导致酶切位点消失。
4楼2012-05-17 22:00:51
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