应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 做过P450的请进，求帮助
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
111/2返回列表12下一页
查看: 1803  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lilihuang1125

金虫 (初入文坛)

[求助] 做过P450的请进，求帮助 已有1人参与

目前做一个植物P450的体外反应，即把P450基因通过酵母异源表达后，提取微粒体，然后在磷酸钾Buffer中，把底物，微粒体和NADPH一起孵育，一直得不到产物，也尝试过用破碎酵母的总蛋白直接孵育，也以失败告终，不知道哪步出了问题。
基因应该没有问题，因为同时做的体内试验得到了产物。
急，请有经验的同学赐教！！！

[ Last edited by lilihuang1125 on 2012-5-17 at 10:14 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-05-17 09:31:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yunshenglmm

铜虫 (小有名气)
遇到同样的问题，痛苦！不知楼主现在做的如何？求帮助
赞一下 回复此楼
2楼2014-08-02 00:18:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-08-03 07:57:48
建议首先确定，重组蛋白有表达吗？光SDS-PAGE电泳不能完全确定，最好是WB再做一下
赞一下 回复此楼
3楼2014-08-02 12:07:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lilihuang1125

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yunshenglmm at 2014-08-02 00:18:01
遇到同样的问题，痛苦！不知楼主现在做的如何？求帮助

你好，我已经做完了，你可以参考一下我的文章，
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubm ... Catharanthus+roseus
赞一下 回复此楼
4楼2014-08-05 01:32:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yunshenglmm

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lilihuang1125 at 2014-08-05 01:32:56
你好，我已经做完了，你可以参考一下我的文章，
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Molecular+characterization+of+the+pentacyclic+triterpenoid+biosynthetic+pathway+in+Catharanthus+roseus...

谢谢楼主，仔细看了一下楼主文章，有两个问题想咨询一下：
1. 楼主为何用粗酶液做酶活，而没有提取酵母微粒体？楼主能否在酵母微粒体提取方面给我点建议，我这边做了N次酵母微粒体提取，都检测不到活性
2. 体外反应为何6h，看了好多文章都是30min搞定
赞一下 回复此楼
5楼2014-08-06 20:52:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yunshenglmm

铜虫 (小有名气)
谢谢楼主，仔细看了楼主的文章，有以下2问题想咨询一下：
1. 楼主为何没有做酵母微粒体，我做了N次酵母微粒体，都没有检测到活性！楼主能否在酵母微粒体提取方面给我点建议
2. 楼主体外反应时间为何那么长，6h，看了很多文章酶反应30min搞定！
赞一下 回复此楼
6楼2014-08-06 20:56:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lilihuang1125

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yunshenglmm at 2014-08-06 20:52:05
谢谢楼主，仔细看了一下楼主文章，有两个问题想咨询一下：
1. 楼主为何用粗酶液做酶活，而没有提取酵母微粒体？楼主能否在酵母微粒体提取方面给我点建议，我这边做了N次酵母微粒体提取，都检测不到活性
2. 体外反 ...

Hi，你好
1 这个是实验条件所限了，我们没有超高速离心机，提微粒体不方便，我建议你先测粗提液，有活性了再提微粒体，但是给不了你具体建议了
2 一般纯化的酶30 min反应时间足够了，但是我用的是P450粗提液，一般文献报道都2个小时以上，6个小时的也常见，我就follow了，当然这不是关键，你30分钟能看到活性就不用反应那么久了，呵呵
赞一下 回复此楼
7楼2014-08-07 11:21:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

98177zjs

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lilihuang1125 at 2014-08-07 11:21:52
Hi，你好
1 这个是实验条件所限了，我们没有超高速离心机，提微粒体不方便，我建议你先测粗提液，有活性了再提微粒体，但是给不了你具体建议了
2 一般纯化的酶30 min反应时间足够了，但是我用的是P450粗提液，一 ...

前辈你好，能交换点wat11吗，有BY4741、 pesc-leu，或者购买也行，求助啦3q
赞一下 回复此楼
8楼2014-11-10 14:28:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kingjazz23

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lilihuang1125 at 2014-08-07 11:21:52
Hi，你好
1 这个是实验条件所限了，我们没有超高速离心机，提微粒体不方便，我建议你先测粗提液，有活性了再提微粒体，但是给不了你具体建议了
2 一般纯化的酶30 min反应时间足够了，但是我用的是P450粗提液，一 ...

你好，我刚刚看到你的文章，有些问题想和你交流一下，方便加一下我的QQ吗？我的QQ是165428287，因为我迟点也要做P450的，所以想请教一下师姐
赞一下 回复此楼
9楼2016-06-25 22:43:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seraphlx

新虫 (初入文坛)
你确定郭你的微粒体中p450有表达么，因为我跟你情况类似，酵母异源表达，但是用CO差示法检测不到450nm最大吸收，即p450基因无表达，所以怎么可能有反应
赞一下 回复此楼
10楼2016-12-20 09:31:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lilihuang1125 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿华东理工大学，080500学硕，317分，求调剂 +10 s1145 2026-03-31 10/500 2026-04-02 11:44 by Sammy2
[考研] 085801 总分275 本科新能源 求调剂 +11 bradoner 2026-04-01 13/650 2026-04-02 11:36 by Sammy2
[考研] 266分，一志愿电气工程，本科材料，求材料专业调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-04-02 3/150 2026-04-02 10:41 by caotw2020
[考研] 材料调剂 +3 一样YWY 2026-04-02 3/150 2026-04-02 10:37 by longlotian
[考研] 085600，材料与化工321分调剂 +8 大馋小子 2026-03-27 10/500 2026-04-02 10:15 by kaiyanjie
[考研] 省双一流重点一本大学招收调剂 +4 wwwwffffff 2026-03-31 7/350 2026-04-01 15:23 by wwwwffffff
[考研] 环境工程调剂 +9 hyzzzzzzz. 2026-04-01 9/450 2026-04-01 14:20 by salamander`
[论文投稿] chinese chemical letters英文版投稿求助 120+4 Yishengeryi 2026-03-30 5/250 2026-04-01 14:11 by 陆小果画大饼
[考研] 085600，321分求调剂 +13 大馋小子 2026-03-31 13/650 2026-04-01 12:35 by chemdavid
[考研] 安徽大学专硕生物与医药专业(086000)324分，英语已过四六级，六级521，求调剂 +10 美味可乐鸡翅 2026-03-26 12/600 2026-04-01 11:17 by syh9288
[考研] 301求调剂 +8 axibli 2026-04-01 8/400 2026-04-01 09:51 by 我的船我的海
[考研] 375求调剂 +7 雨夏整夜 2026-03-29 7/350 2026-03-31 18:52 by xhai2011
[考研] 086000调剂 +5 7901117076 2026-03-26 5/250 2026-03-31 17:45 by 544594351
[考研] 本科211生物医学工程085409求调剂339分 +7 里子木yy 2026-03-29 7/350 2026-03-31 14:35 by fmesaito
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +4 崔wj 2026-03-31 4/200 2026-03-31 11:56 by jp9609
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-29 3/150 2026-03-31 10:06 by cal0306
[考研] 吉大生物学326分求调剂 +3 sunnyupup 2026-03-31 3/150 2026-03-31 09:28 by longlotian
[考研] 哈尔滨工业大学材料与化工专硕378求调剂 +3 塔比乌斯 2026-03-30 3/150 2026-03-30 22:55 by 无际的草原
[考研] 0703 化学 求调剂，一志愿山东大学 342 分 +7 Shern—- 2026-03-28 7/350 2026-03-30 16:31 by nothing投稿中
[考研] 330一志愿中国海洋大学 化学工程 085602 有读博意愿 求调剂 +3 wywy.. 2026-03-27 4/200 2026-03-28 03:32 by fmesaito
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭