应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 分析前沿 » 【求助】做过巯基DNA接金胶的，有经验的请进啊！
181/1返回列表
查看: 5668  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

649251126

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助】做过巯基DNA接金胶的，有经验的请进啊！

实验时将两者混合，放摇床16小时，理论讲AU-S键可以结合。第二天发现金胶变色啦，实验没成功，做了好几次都悲催啦！该实验DNA和金胶有无比例要求？必须加活化剂TCEP吗？请求有经验的朋友指点一下，越详细越好，谢谢！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

金、磁珠与抗体的结合

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-04-05 20:12:44
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Indicator83

木虫 (初入文坛)
你的DNA前期是否处理过呢，带有巯基的DNA是不能拿来直接使用的，用之前要用DTT打开其双硫键（比例为DNA：DTT摩尔浓度比为1：10-100都可），配制成一定浓度的储备液体，备用。
DNA和金胶的浓度并没有一定的比例要求，要根据你的实验自己确定，毕竟一个金胶上接N个DNA和一个金胶接一个DNA比例差的就很大，参考具体文献吧。
我做的金胶和巯基DNA结合，就是摇床12小时，陈化12小时，整个过程避光。
由于金胶接DNA后会使金胶粒径变大，因此颜色会略有变化，因此不建议使用高浓度DNA，一半在10-6M这个浓度左右，至于金胶浓度，你还得自己斟酌。
赞一下 回复此楼
2楼2011-04-05 20:59:50
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

649251126

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by Indicator83 at 2011-04-05 20:59:50:
你的DNA前期是否处理过呢，带有巯基的DNA是不能拿来直接使用的，用之前要用DTT打开其双硫键（比例为DNA：DTT摩尔浓度比为1：10-100都可），配制成一定浓度的储备液体，备用。
DNA和金胶的浓度并没有一定的比例要 ...

以前看文献有用TCEP活化的，但是效果并不是很好啊！问了些师兄师姐，大家说直接连就可以，有些文献也这么说的。感觉效果不好哈！能跟我具体说下你的步骤与注意事项吗？谢谢!
赞一下 回复此楼
3楼2011-04-06 12:17:17
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Indicator83

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 649251126 at 2011-04-06 06:17:17:
以前看文献有用TCEP活化的，但是效果并不是很好啊！问了些师兄师姐，大家说直接连就可以，有些文献也这么说的。感觉效果不好哈！能跟我具体说下你的步骤与注意事项吗？谢谢!

其实这还要具体看你买的哪家的DNA的，我们买的DNA要么是赛百盛的，要么是上海生工的，其实带有巯基的DNA巯基端都经过处理，直接用是肯定不行的，一定要经过DTT打断其双硫键，比如你要配置10-6M的溶液，那就是先配置10-4M的DTT缓冲溶液作为稀释溶液，稀释后在摇床上1小时，这时候巯基才露出，不是活化，然后在和金胶连接。可能是你前期处理问题，当然你师兄师姐们的意见也要参考。
赞一下 回复此楼
4楼2011-04-06 12:32:42
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

649251126

铜虫 (小有名气)
又做了一次，感觉还可以，呵呵。看来加盐老化时快速摇很重要哈！
赞一下 回复此楼
5楼2011-04-19 10:35:53
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

649251126

铜虫 (小有名气)
你好，你们的DTT是怎么配的啊？
赞一下 回复此楼
6楼2011-04-29 09:09:52
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhoubinzeng

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
DTT处理好 是怎么纯化的？DTT毒性强 大家有没有用过其替代品TCEP 用它激活巯基时需要临用临配吗
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2011-09-05 11:06:06
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huang6348

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Indicator83 at 2011-04-05 20:59:50:
你的DNA前期是否处理过呢，带有巯基的DNA是不能拿来直接使用的，用之前要用DTT打开其双硫键（比例为DNA：DTT摩尔浓度比为1：10-100都可），配制成一定浓度的储备液体，备用。
DNA和金胶的浓度并没有一定的比例要 ...

你好，我想问下tcep 用什么配的  有没有相关文献  关于它和dNa 浓度比的
赞一下 回复此楼
8楼2011-09-06 11:29:59
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Indicator83

木虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by huang6348 at 2011-09-06 05:29:59:
你好，我想问下tcep 用什么配的  有没有相关文献  关于它和dNa 浓度比的

和你配置DNA的溶剂一致。比如我用0.01M的PBS作为溶剂配置DNA贮备液，那么TCEP也用0.01M的PBS配置。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2011-09-06 12:24:28
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huang6348

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by Indicator83 at 2011-09-06 12:24:28:
和你配置DNA的溶剂一致。比如我用0.01M的PBS作为溶剂配置DNA贮备液，那么TCEP也用0.01M的PBS配置。

你好，我是想问  比如我想配1uM的DNA 加入的TCEP浓度应该是DNA浓度的多少倍？
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2011-09-06 13:47:44
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Indicator83

木虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by huang6348 at 2011-09-06 07:47:44:
你好，我是想问  比如我想配1uM的DNA 加入的TCEP浓度应该是DNA浓度的多少倍？

TCEP大约100uM，TCEP的浓度是DNA浓度的50-100倍，10倍偏低了点。
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2011-09-07 09:06:53
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Annaliwei

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请高人指点，配制DNA的缓冲溶液是不是需要灭菌？
赞一下 回复此楼
12楼2012-09-10 16:14:09
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liruizhen007

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
1208432楼: Originally posted by zhoubinzeng at 2011-09-05 11:06:06
DTT处理好 是怎么纯化的？DTT毒性强 大家有没有用过其替代品TCEP 用它激活巯基时需要临用临配吗

不需要临时配，直接配成50mM溶液和DNA混合30min后放在4摄氏度可以用很久
赞一下 回复此楼
13楼2013-01-23 14:22:28
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liruizhen007

金虫 (小有名气)
引用回帖:
1208875楼: Originally posted by huang6348 at 2011-09-06 11:29:59
你好，我想问下tcep 用什么配的  有没有相关文献  关于它和dNa 浓度比的...

直接加水配，50mM
回复此楼
14楼2013-01-23 14:22:57
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liruizhen007

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
1276751楼: Originally posted by Annaliwei at 2012-09-10 16:14:09
请高人指点，配制DNA的缓冲溶液是不是需要灭菌？

不用，用去离子水，或者直接买tris-HCl缓冲液
赞一下 回复此楼
15楼2013-01-23 14:24:47
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

B100-1

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by Indicator83 at 2011-04-05 20:59:50
你的DNA前期是否处理过呢，带有巯基的DNA是不能拿来直接使用的，用之前要用DTT打开其双硫键（比例为DNA：DTT摩尔浓度比为1：10-100都可），配制成一定浓度的储备液体，备用。
DNA和金胶的浓度并没有一定的比例要求 ...

你用的是双链DNA吗，你如何证明DNA有连接上金胶呢，你是讲DNA与金胶先混合12h在加盐陈化是吗，我也有做类似的Au-S连接但是怎么都连不上啊，求赐教啊
赞一下 回复此楼
16楼2013-11-06 08:34:08
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Indicator83

木虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
16楼: Originally posted by B100-1 at 2013-11-06 02:34:08
你用的是双链DNA吗，你如何证明DNA有连接上金胶呢，你是讲DNA与金胶先混合12h在加盐陈化是吗，我也有做类似的Au-S连接但是怎么都连不上啊，求赐教啊...

单链人工合成DNA，拍个TEM就可以证明，现在比较成熟的手法。加盐沉化不用太久，否则会引起聚沉。
赞一下 回复此楼
17楼2013-11-06 20:45:09
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lcp0802

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 649251126 at 2011-04-19 12:35:53
又做了一次，感觉还可以，呵呵。看来加盐老化时快速摇很重要哈！

Did you use DTT or TCEP to reduce S-S to HS-?
赞一下 回复此楼
18楼2014-08-15 18:38:20
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 649251126 的主题更新
181/1返回列表
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿中南化学337求调剂 +4 niko- 2026-03-19 5/250 2026-03-20 13:49 by 促天成
[考研] 招收调剂硕士 +4 lidianxing 2026-03-19 12/600 2026-03-20 12:25 by lidianxing
[考研] 085700资源与环境308求调剂 +10 墨墨漠 2026-03-18 11/550 2026-03-20 11:57 by 学员8dgXkO
[考研] 317求调剂 +4 申子申申 2026-03-19 9/450 2026-03-20 11:08 by 申子申申
[考研] 321求调剂 +8 何润采123 2026-03-18 10/500 2026-03-19 16:46 by 何润采123
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +8 zlingli 2026-03-13 8/400 2026-03-19 16:32 by 轻松不少随
[考研] 一志愿福大288有机化学，求调剂 +3 小木虫200408204 2026-03-18 3/150 2026-03-19 13:31 by houyaoxu
[考研] 0817调剂 +3 没有答案_ 2026-03-14 3/150 2026-03-19 09:51 by Xu de nuo
[考研] 0703化学调剂，求各位老师收留 +10 秋有木北 2026-03-14 10/500 2026-03-19 05:52 by anny19840123
[考研] 一志愿华中科技大学，080502，354分求调剂 +4 守候夕阳CF 2026-03-18 4/200 2026-03-18 22:16 by li123456789.
[考研] 【同济软件】软件（085405）考研求调剂 +3 2026eternal 2026-03-18 3/150 2026-03-18 19:09 by 搏击518
[考研] 0854可跨调剂，一作一项核心论文五项专利，省、国级证书40+数一英一287 +8 小李0854 2026-03-16 8/400 2026-03-18 14:35 by 搏击518
[基金申请] 被我言中：新模板不强调格式了，假专家开始管格式了 +4 beefly 2026-03-14 4/200 2026-03-17 22:04 by 黄鸟于飞Chao
[考研] 332求调剂 +6 Zz版 2026-03-13 6/300 2026-03-17 17:03 by ruiyingmiao
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
[考研] 0854控制工程 359求调剂 可跨专业 +3 626776879 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:42 by 626776879
[考研] 070300化学学硕求调剂 +6 太想进步了0608 2026-03-16 6/300 2026-03-16 16:13 by kykm678
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
[考研] 297求调剂 +4 学海漂泊 2026-03-13 4/200 2026-03-14 11:51 by 热情沙漠
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭