应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 分析前沿 » 【求助】做过巯基DNA接金胶的，有经验的请进啊！
51/1返回列表
查看: 5754  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

649251126

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助】做过巯基DNA接金胶的，有经验的请进啊！

实验时将两者混合，放摇床16小时，理论讲AU-S键可以结合。第二天发现金胶变色啦，实验没成功，做了好几次都悲催啦！该实验DNA和金胶有无比例要求？必须加活化剂TCEP吗？请求有经验的朋友指点一下，越详细越好，谢谢！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

金、磁珠与抗体的结合

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-04-05 20:12:44
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhoubinzeng

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
DTT处理好 是怎么纯化的？DTT毒性强 大家有没有用过其替代品TCEP 用它激活巯基时需要临用临配吗
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2011-09-05 11:06:06
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

Indicator83

木虫 (初入文坛)
你的DNA前期是否处理过呢，带有巯基的DNA是不能拿来直接使用的，用之前要用DTT打开其双硫键（比例为DNA：DTT摩尔浓度比为1：10-100都可），配制成一定浓度的储备液体，备用。
DNA和金胶的浓度并没有一定的比例要求，要根据你的实验自己确定，毕竟一个金胶上接N个DNA和一个金胶接一个DNA比例差的就很大，参考具体文献吧。
我做的金胶和巯基DNA结合，就是摇床12小时，陈化12小时，整个过程避光。
由于金胶接DNA后会使金胶粒径变大，因此颜色会略有变化，因此不建议使用高浓度DNA，一半在10-6M这个浓度左右，至于金胶浓度，你还得自己斟酌。
赞一下 回复此楼
2楼2011-04-05 20:59:50
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

649251126

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by Indicator83 at 2011-04-05 20:59:50:
你的DNA前期是否处理过呢，带有巯基的DNA是不能拿来直接使用的，用之前要用DTT打开其双硫键（比例为DNA：DTT摩尔浓度比为1：10-100都可），配制成一定浓度的储备液体，备用。
DNA和金胶的浓度并没有一定的比例要 ...

以前看文献有用TCEP活化的，但是效果并不是很好啊！问了些师兄师姐，大家说直接连就可以，有些文献也这么说的。感觉效果不好哈！能跟我具体说下你的步骤与注意事项吗？谢谢!
赞一下 回复此楼
3楼2011-04-06 12:17:17
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Indicator83

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 649251126 at 2011-04-06 06:17:17:
以前看文献有用TCEP活化的，但是效果并不是很好啊！问了些师兄师姐，大家说直接连就可以，有些文献也这么说的。感觉效果不好哈！能跟我具体说下你的步骤与注意事项吗？谢谢!

其实这还要具体看你买的哪家的DNA的，我们买的DNA要么是赛百盛的，要么是上海生工的，其实带有巯基的DNA巯基端都经过处理，直接用是肯定不行的，一定要经过DTT打断其双硫键，比如你要配置10-6M的溶液，那就是先配置10-4M的DTT缓冲溶液作为稀释溶液，稀释后在摇床上1小时，这时候巯基才露出，不是活化，然后在和金胶连接。可能是你前期处理问题，当然你师兄师姐们的意见也要参考。
赞一下 回复此楼
4楼2011-04-06 12:32:42
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 295分求调剂 +6 ?要上岸? 2026-04-17 6/300 2026-04-21 08:18 by Equinoxhua
[考研] 一志愿中科大材料与化工，353分还有调剂学校吗 +11 否极泰来2026 2026-04-15 13/650 2026-04-20 22:31 by Equinoxhua
[考研] 085600材料与化工调剂 5+3 孜孜不倦2002 2026-04-19 6/300 2026-04-20 21:25 by babero
[考研] 320求调剂 +6 深郊akm 2026-04-17 6/300 2026-04-20 18:57 by fs26jie
[论文投稿] 期刊推荐 +3 材料研究生 2026-04-15 5/250 2026-04-20 16:02 by 豆豆7758
[论文投稿] 有没有接收比较快的sci期刊呀，最好在一个月之内的，研三孩子求毕业 20+4 之护着 2026-04-16 7/350 2026-04-20 15:45 by 豆豆7758
[考研] 337求调剂 +3 jyz04 2026-04-18 3/150 2026-04-20 12:24 by 研可安
[考博] 申博/考博 +4 啃面包的小书虫 2026-04-17 5/250 2026-04-20 10:47 by YuY66
[考博] 湖南大学刘巧玲课题组2026年第二批次博士研究生招生信息 +3 南风观火 2026-04-18 5/250 2026-04-20 10:13 by 南风观火
[考研] 求计算机方向调剂 +3 Toffee2 2026-04-16 6/300 2026-04-19 22:37 by ll叶
[考研] 通信工程求调剂！！！ +7 zlb770521 2026-04-14 7/350 2026-04-19 20:56 by Equinoxhua
[考研] 294求调剂 +8 淡然654321 2026-04-17 9/450 2026-04-19 19:51 by Equinoxhua
[考研] 304求调剂 +8 castLight 2026-04-16 8/400 2026-04-19 17:14 by 中豫男
[考研] 085404 22408 309分求调剂 +10 lzmk 2026-04-14 11/550 2026-04-19 16:42 by 中豫男
[考研] 接受任何调剂 +6 也就是栗子 2026-04-17 7/350 2026-04-18 17:20 by 涵竹刘
[考研] 297，工科调剂? +5 河南农业大学-能 2026-04-14 5/250 2026-04-18 15:17 by Equinoxhua
[考研] 收到复试调剂但是去不了 +8 小蜗牛* 2026-04-16 8/400 2026-04-18 11:15 by zixin2025
[考研] 急需调剂 +9 绝不放弃22 2026-04-15 10/500 2026-04-18 08:09 by chixmc
[有机交流] 二苯甲酮酸类衍生物 50+3 小白爱主人 2026-04-17 6/300 2026-04-17 18:47 by kf2781974
[考研] 药学求调剂 +14 喽哈加油 2026-04-14 16/800 2026-04-16 10:15 by beilsong20
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭