应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 分析前沿 » 【求助】做过巯基DNA接金胶的，有经验的请进啊！
51/1返回列表
查看: 6192  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

649251126

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助】做过巯基DNA接金胶的，有经验的请进啊！

实验时将两者混合，放摇床16小时，理论讲AU-S键可以结合。第二天发现金胶变色啦，实验没成功，做了好几次都悲催啦！该实验DNA和金胶有无比例要求？必须加活化剂TCEP吗？请求有经验的朋友指点一下，越详细越好，谢谢！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

金、磁珠与抗体的结合

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-04-05 20:12:44
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhoubinzeng

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
DTT处理好 是怎么纯化的？DTT毒性强 大家有没有用过其替代品TCEP 用它激活巯基时需要临用临配吗
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2011-09-05 11:06:06
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

Indicator83

木虫 (初入文坛)
你的DNA前期是否处理过呢，带有巯基的DNA是不能拿来直接使用的，用之前要用DTT打开其双硫键（比例为DNA：DTT摩尔浓度比为1：10-100都可），配制成一定浓度的储备液体，备用。
DNA和金胶的浓度并没有一定的比例要求，要根据你的实验自己确定，毕竟一个金胶上接N个DNA和一个金胶接一个DNA比例差的就很大，参考具体文献吧。
我做的金胶和巯基DNA结合，就是摇床12小时，陈化12小时，整个过程避光。
由于金胶接DNA后会使金胶粒径变大，因此颜色会略有变化，因此不建议使用高浓度DNA，一半在10-6M这个浓度左右，至于金胶浓度，你还得自己斟酌。
赞一下 回复此楼
2楼2011-04-05 20:59:50
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

649251126

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by Indicator83 at 2011-04-05 20:59:50:
你的DNA前期是否处理过呢，带有巯基的DNA是不能拿来直接使用的，用之前要用DTT打开其双硫键（比例为DNA：DTT摩尔浓度比为1：10-100都可），配制成一定浓度的储备液体，备用。
DNA和金胶的浓度并没有一定的比例要 ...

以前看文献有用TCEP活化的，但是效果并不是很好啊！问了些师兄师姐，大家说直接连就可以，有些文献也这么说的。感觉效果不好哈！能跟我具体说下你的步骤与注意事项吗？谢谢!
赞一下 回复此楼
3楼2011-04-06 12:17:17
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Indicator83

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 649251126 at 2011-04-06 06:17:17:
以前看文献有用TCEP活化的，但是效果并不是很好啊！问了些师兄师姐，大家说直接连就可以，有些文献也这么说的。感觉效果不好哈！能跟我具体说下你的步骤与注意事项吗？谢谢!

其实这还要具体看你买的哪家的DNA的，我们买的DNA要么是赛百盛的，要么是上海生工的，其实带有巯基的DNA巯基端都经过处理，直接用是肯定不行的，一定要经过DTT打断其双硫键，比如你要配置10-6M的溶液，那就是先配置10-4M的DTT缓冲溶液作为稀释溶液，稀释后在摇床上1小时，这时候巯基才露出，不是活化，然后在和金胶连接。可能是你前期处理问题，当然你师兄师姐们的意见也要参考。
赞一下 回复此楼
4楼2011-04-06 12:32:42
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭