24小时热门版块排行榜    

查看: 1766  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

lilihuang1125

金虫 (初入文坛)

[求助] 做过P450的请进,求帮助 已有1人参与

目前做一个植物P450的体外反应,即把P450基因通过酵母异源表达后,提取微粒体,然后在磷酸钾Buffer中,把底物,微粒体和NADPH一起孵育,一直得不到产物,也尝试过用破碎酵母的总蛋白直接孵育,也以失败告终,不知道哪步出了问题。
基因应该没有问题,因为同时做的体内试验得到了产物。
急,请有经验的同学赐教!!!

[ Last edited by lilihuang1125 on 2012-5-17 at 10:14 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yunshenglmm

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lilihuang1125 at 2014-08-05 01:32:56
你好,我已经做完了,你可以参考一下我的文章,
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Molecular+characterization+of+the+pentacyclic+triterpenoid+biosynthetic+pathway+in+Catharanthus+roseus...

谢谢楼主,仔细看了一下楼主文章,有两个问题想咨询一下:
1. 楼主为何用粗酶液做酶活,而没有提取酵母微粒体?楼主能否在酵母微粒体提取方面给我点建议,我这边做了N次酵母微粒体提取,都检测不到活性
2. 体外反应为何6h,看了好多文章都是30min搞定
5楼2014-08-06 20:52:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

yunshenglmm

金虫 (小有名气)

遇到同样的问题,痛苦!不知楼主现在做的如何?求帮助
2楼2014-08-02 00:18:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)


【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-08-03 07:57:48
建议首先确定,重组蛋白有表达吗?光SDS-PAGE电泳不能完全确定,最好是WB再做一下
3楼2014-08-02 12:07:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lilihuang1125

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yunshenglmm at 2014-08-02 00:18:01
遇到同样的问题,痛苦!不知楼主现在做的如何?求帮助

你好,我已经做完了,你可以参考一下我的文章,
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubm ... Catharanthus+roseus
4楼2014-08-05 01:32:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:19 by 馥安馥安
[考研] 材料化工调剂 +3 今夏不夏 2026-03-01 3/150 2026-03-01 10:13 by 杨杨杨紫
[考研] 0856化工专硕求调剂 +4 董boxing 2026-03-01 4/200 2026-03-01 10:11 by 杨杨杨紫
[硕博家园] 博士自荐 +6 科研狗111 2026-02-26 10/500 2026-03-01 10:02 by 科研狗111
[考研] 高分子化学与物理调剂 +4 好好好1233 2026-02-28 8/400 2026-03-01 09:26 by 好好好1233
[考研] 290求调剂 +6 材料专硕调剂; 2026-02-28 7/350 2026-03-01 09:21 by L135790
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[考研] 284求调剂 +5 天下熯 2026-02-28 5/250 2026-03-01 08:49 by ms629
[考研] 材料类求调剂 +7 wana_kiko 2026-02-28 7/350 2026-03-01 07:55 by ms629
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧? +5 ieewxg 2026-02-25 6/300 2026-03-01 00:10 by addressing
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[考研] 化工专硕348,一志愿985求调剂 +4 弗格个 2026-02-28 6/300 2026-02-28 22:00 by wang_dand
[考研] 292求调剂 +3 yhk_819 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:57 by gaoxiaoniuma
[考研] 295求调剂 +5 19171856320 2026-02-28 5/250 2026-02-28 21:39 by gaoxiaoniuma
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +4 礼堂丁真258 2026-02-28 6/300 2026-02-28 16:18 by 求调剂zz
[考研] 0856调剂 +3 刘梦微 2026-02-28 3/150 2026-02-28 13:22 by houyaoxu
[考研] 寻找调剂 +3 LYidhsjabdj 2026-02-28 3/150 2026-02-28 12:59 by miniwendy
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
请填处理意见