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lilihuang1125

金虫 (初入文坛)

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[求助] 做过P450的请进，求帮助已有1人参与

目前做一个植物P450的体外反应，即把P450基因通过酵母异源表达后，提取微粒体，然后在磷酸钾Buffer中，把底物，微粒体和NADPH一起孵育，一直得不到产物，也尝试过用破碎酵母的总蛋白直接孵育，也以失败告终，不知道哪步出了问题。
基因应该没有问题，因为同时做的体内试验得到了产物。
急，请有经验的同学赐教！！！

[ Last edited by lilihuang1125 on 2012-5-17 at 10:14 ]

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1楼 2012-05-17 09:31:19

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yunshenglmm

金虫 (小有名气)

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专业: 植物生理与生化

引用回帖:

4楼: Originally posted by lilihuang1125 at 2014-08-05 01:32:56
你好，我已经做完了，你可以参考一下我的文章，
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Molecular+characterization+of+the+pentacyclic+triterpenoid+biosynthetic+pathway+in+Catharanthus+roseus...

谢谢楼主，仔细看了一下楼主文章，有两个问题想咨询一下：
1. 楼主为何用粗酶液做酶活，而没有提取酵母微粒体？楼主能否在酵母微粒体提取方面给我点建议，我这边做了N次酵母微粒体提取，都检测不到活性
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