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lilihuang1125

金虫 (初入文坛)

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[求助] 做过P450的请进，求帮助已有1人参与

目前做一个植物P450的体外反应，即把P450基因通过酵母异源表达后，提取微粒体，然后在磷酸钾Buffer中，把底物，微粒体和NADPH一起孵育，一直得不到产物，也尝试过用破碎酵母的总蛋白直接孵育，也以失败告终，不知道哪步出了问题。
基因应该没有问题，因为同时做的体内试验得到了产物。
急，请有经验的同学赐教！！！

[ Last edited by lilihuang1125 on 2012-5-17 at 10:14 ]

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1楼 2012-05-17 09:31:19

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98177zjs

新虫 (初入文坛)

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专业: 抗体工程学

引用回帖:

7楼: Originally posted by lilihuang1125 at 2014-08-07 11:21:52
Hi，你好
1 这个是实验条件所限了，我们没有超高速离心机，提微粒体不方便，我建议你先测粗提液，有活性了再提微粒体，但是给不了你具体建议了
2 一般纯化的酶30 min反应时间足够了，但是我用的是P450粗提液，一 ...

前辈你好，能交换点wat11吗，有BY4741、 pesc-leu，或者购买也行，求助啦3q