24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1811  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

lilihuang1125

金虫 (初入文坛)

[求助] 做过P450的请进,求帮助 已有1人参与

目前做一个植物P450的体外反应,即把P450基因通过酵母异源表达后,提取微粒体,然后在磷酸钾Buffer中,把底物,微粒体和NADPH一起孵育,一直得不到产物,也尝试过用破碎酵母的总蛋白直接孵育,也以失败告终,不知道哪步出了问题。
基因应该没有问题,因为同时做的体内试验得到了产物。
急,请有经验的同学赐教!!!

[ Last edited by lilihuang1125 on 2012-5-17 at 10:14 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lilihuang1125

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by yunshenglmm at 2014-08-06 20:52:05
谢谢楼主,仔细看了一下楼主文章,有两个问题想咨询一下:
1. 楼主为何用粗酶液做酶活,而没有提取酵母微粒体?楼主能否在酵母微粒体提取方面给我点建议,我这边做了N次酵母微粒体提取,都检测不到活性
2. 体外反 ...

Hi,你好
1 这个是实验条件所限了,我们没有超高速离心机,提微粒体不方便,我建议你先测粗提液,有活性了再提微粒体,但是给不了你具体建议了
2 一般纯化的酶30 min反应时间足够了,但是我用的是P450粗提液,一般文献报道都2个小时以上,6个小时的也常见,我就follow了,当然这不是关键,你30分钟能看到活性就不用反应那么久了,呵呵
7楼2014-08-07 11:21:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

yunshenglmm

铜虫 (小有名气)

遇到同样的问题,痛苦!不知楼主现在做的如何?求帮助
2楼2014-08-02 00:18:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)


【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-08-03 07:57:48
建议首先确定,重组蛋白有表达吗?光SDS-PAGE电泳不能完全确定,最好是WB再做一下
3楼2014-08-02 12:07:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lilihuang1125

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yunshenglmm at 2014-08-02 00:18:01
遇到同样的问题,痛苦!不知楼主现在做的如何?求帮助

你好,我已经做完了,你可以参考一下我的文章,
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubm ... Catharanthus+roseus
4楼2014-08-05 01:32:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 292分,材料与化工,申请调剂 +19 程晴之 2026-04-01 23/1150 2026-04-02 11:59 by 程晴之
[考研] 计算机265跨调环境 +5 Yumeng_6 2026-03-27 5/250 2026-04-02 10:54 by guanxin1001
[考研] 材料求调剂 +10 呢呢妮妮 2026-04-01 13/650 2026-04-02 09:17 by olim
[考研] 一志愿北交大材料工程,总分358 +4 cs0106 2026-04-01 4/200 2026-04-02 07:42 by 尚水阁主
[考研] 302求调剂一志愿北航070300,本科郑大化学 +8 圣日耳曼条 2026-04-01 11/550 2026-04-02 07:40 by chemdavid
[考研] 英一数一408,总分284,二战真诚求调剂 +12 12.27 2026-03-30 14/700 2026-04-02 00:18 by 欣喜777
[考研] 291求调剂 +20 Y-cap 2026-03-29 25/1250 2026-04-01 23:49 by 欣喜777
[考研] 江苏科技大学招材料研究生 +4 Su032713. 2026-04-01 5/250 2026-04-01 22:03 by cccchenso
[考研] 求调剂 +5 零八# 2026-03-27 5/250 2026-04-01 14:40 by yulian1987
[考研] 土木304求调剂 +3 兔突突突, 2026-03-31 3/150 2026-04-01 09:42 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂 +9 小蜡新笔 2026-03-29 10/500 2026-03-31 19:52 by Dyhoer
[考研] 254材料与化工求调剂 +3 翰冬林楠 2026-03-30 4/200 2026-03-31 17:53 by yishunmin
[考研] 085404 22408 315分 +5 zhuangyan123 2026-03-31 6/300 2026-03-31 13:48 by limeifeng
[考研] 一志愿西电085401数一英一299求调剂 六级521 +4 爱吃大鸭梨 2026-03-31 4/200 2026-03-31 11:51 by 搏击518
[考研] 287求调剂 +17 land xuxu 2026-03-26 17/850 2026-03-31 11:16 by Zzxxxs
[考研] 一志愿食品科学与工程083200求调剂 +4 XQTJZ 2026-03-30 4/200 2026-03-31 04:10 by fmesaito
[考研] 材料专硕 085600求调剂 +7 BBQ233 2026-03-30 7/350 2026-03-30 17:44 by oooqiao
[考研] 332求调剂 +6 @MZB382400 2026-03-28 6/300 2026-03-30 16:57 by 无际的草原
[考研] 331环境科学与工程求调剂 +3 熠然好运气 2026-03-27 3/150 2026-03-28 04:11 by fmesaito
[考研] 298调剂 +3 jiyingjie123 2026-03-27 3/150 2026-03-27 11:57 by wxiongid
信息提示
请填处理意见