| 查看: 3468 | 回复: 22 | ||||
[求助]
植物RNA的提取
|
||||
|
我在提富含多糖多酚的植物的RNA，提的效果不是很好，大家有什么好方法没 我在文献中查到了CTAB结合SDS法，这个方法如下我对其中的几个温度不太理解 请大侠们解释下吧 第二步中的提到的低温处理 起到了什么作用啊 大家也帮我看下这个方法有什么不合理的地方没 谢谢大家了 1 CTAB结合SDS法。分别称取叶片、叶柄和韧皮部各0.4 g于研钵中，加入0.05 g PVP，加入适量液氮，迅速研磨成粉末状，并将所有粉末全部转入2 mL离心管中；加入800 μL提取液（680 μL CTAB提取液、 80 μL 10%SDS、40 μL β-巯基乙醇； CTAB 提取液成分为：2%CTAB、2.5 mol/L NaCl、0.5 mol/L Tris、50 mmol/LEDTA），用力剧烈震荡使所有粉末均匀悬浮于提取液中； 2 [font=黑体]65℃水浴20 min，期间剧烈震荡，使其充分混合，水浴后将离心管迅速放入-80℃冰箱中低温处理2 h以上； 3 取出经低温处理后的混合物，将其置于45℃水浴10 min，期间轻轻震荡，使完全溶解； 4 4℃，12000 r/min 离心30 min，将上清液转入预冷的2 mL离心管中，加入等体积酚∶氯仿∶异戊醇(25:24:1，V/V/V)，在冰上用力振荡，使其充分混匀， 5 4℃，12000 r/min离心15 min（抽提2次），将上清液转入预冷过的1.5 mL离心管中，加入12 mol/L LiCl，使其终浓度为2 mol/L，冰上轻震荡充分混匀后置于-20℃条件下存放2 h以上； 6 4℃，12000 r/min 离心 10 min，去除上清液，加入 400 μL 预冷的75%的酒精清洗（重复2次）；室温下干燥15 min，加 20 μL DEPC-H2O 溶 解 进 行 下 一 步 试 验 或 置于-80℃冰箱中保存备用。 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 共享有用资源 |
» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有178人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有15人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 植物RNA提取后电泳检测
已经有16人回复
- 请问用于提取rna的植物组织材料在-80能存放多久？
已经有5人回复
- 从植物叶片的总RNA中提取出miRNA，这个miRNA是未知的，有效的方法怎么做？
已经有7人回复
- 植物RNA提取试剂盒
已经有9人回复
- 【求助/交流】买提取植物RNA的试剂盒
已经有4人回复
- 【求助/交流】异硫氰酸胍法提取植物RNA中DNA残留问题~回帖就送币！！！
已经有14人回复
- 【求助/交流】请教植物RNA提取和转录组学
已经有16人回复
- 【求助/交流】植物组织RNA提取求高人指点
已经有6人回复
- 【求助/交流】苦瓜各部分抽提总RNA所遇到的关于材料和试剂的问题
已经有5人回复
- 【求助/交流】想问问天根植物总RNA提取试剂盒的使用
已经有9人回复
atlanticwi
金虫 (正式写手)
琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
- MolEPI: 25
- 应助: 138 (高中生)
- 金币: 141.2
- 散金: 350
- 红花: 13
- 帖子: 536
- 在线: 313.2小时
- 虫号: 1099992
- 注册: 2010-09-15
- 专业: 植物生理与生化
17楼2012-05-23 00:54:57
starseacow
专家顾问 (职业作家)
-
专家经验: +426 - MolEPI: 3
- 应助: 1217 (讲师)
- 金币: 9097.3
- 散金: 16445
- 红花: 226
- 帖子: 4669
- 在线: 2320.2小时
- 虫号: 1136974
- 注册: 2010-11-02
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
- 管辖: 动植物
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
西瓜: 金币+3, Good！ 2012-05-14 18:52:49
欢仔: 金币+3, ★★★★★最佳答案, 非常感谢 2012-05-14 21:25:18
西瓜: 金币+3, Good！ 2012-05-14 18:52:49
欢仔: 金币+3, ★★★★★最佳答案, 非常感谢 2012-05-14 21:25:18
|
同意楼上的意见，可能要在操作上下点功夫。楼主所说的CTAB-SDS法，我只查到2012年中国农学通报上一篇关于葡萄的文章，不知楼主是否参考的这个。这种方法没见别的文献有报道，建议楼主参考时要谨慎。 多糖多酚类植物材料提RNA，我觉得主要需要添加一步抽提派出糖及酚的干扰，我手头收集的文献有建议使用70%丙酮抽提后用SDS-LiCl法提取。此外还有很多文献提出有用的建议，楼主不妨以比较可靠的经典方法做基础，参考这些文献自己摸索一下，不要盲目照着单一文献做。 |
11楼2012-05-14 18:17:50
5楼2012-05-14 08:42:33
10楼2012-05-14 17:18:16
淘气维尼89
木虫 (小有名气)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 2193.1
- 帖子: 129
- 在线: 125.1小时
- 虫号: 1764336
- 注册: 2012-04-18
- 性别: GG
- 专业: 抗体工程学
13楼2012-05-15 09:01:38
starseacow
专家顾问 (职业作家)
-
专家经验: +426 - MolEPI: 3
- 应助: 1217 (讲师)
- 金币: 9097.3
- 散金: 16445
- 红花: 226
- 帖子: 4669
- 在线: 2320.2小时
- 虫号: 1136974
- 注册: 2010-11-02
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
- 管辖: 动植物
2楼2012-05-13 22:32:57
3楼2012-05-13 23:56:14
starseacow
专家顾问 (职业作家)
-
专家经验: +426 - MolEPI: 3
- 应助: 1217 (讲师)
- 金币: 9097.3
- 散金: 16445
- 红花: 226
- 帖子: 4669
- 在线: 2320.2小时
- 虫号: 1136974
- 注册: 2010-11-02
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
- 管辖: 动植物
4楼2012-05-14 00:23:38
c19345174
银虫 (初入文坛)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 446.1
- 帖子: 25
- 在线: 24.7小时
- 虫号: 1689833
- 注册: 2012-03-14
- 性别: GG
- 专业: 中药学其他科学问题
6楼2012-05-14 13:08:24
7楼2012-05-14 14:44:07
8楼2012-05-14 14:44:32
9楼2012-05-14 14:48:41
