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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR出现问题，求高人解答
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rebornpro

铁虫 (初入文坛)

[求助] PCR出现问题，求高人解答

1、PCR的时候，本来是要加无菌水的，结果误加了PBS，会不会有什么影响？会不会P不出来？
2、提了几个细菌的基因组之后，准备将其稀释做PCR的模版，一般都是用的无菌水稀释，如果我用的是PBS，并在-20℃保存备用。这样处理之后，还能不能用来做后续的实验（如PCR等）？
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1楼 2012-05-09 21:21:21
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孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 专家考核, 专家还是很厉害的哦 2012-05-10 13:44:05
首先你这种情况还真没碰到过。PBS和无酶水的区别是多了几种离子，钾离子，钠离子，氯离子等等。但是我记得这些离子不会对体系中酶的活性产生影响，倒是在对产物跑胶的时候会产生影响。其次，PBS的PH好像是在7.3左右，不知在此PH下会不会对酶活性有影响？！PH的影响可能是主要的。最后，由于你用的PBS应该是普通的，不是无酶的，那么如果有杂质的话可能也会产生影响。事实上PBS中是有杂质的，因为根据经验，我们配的PBS长期存放后会有沉淀。
     因为我没遇到这种情况过，所以只能帮你分析，不能给你确定答案，个人建议楼主可以去尝试做一下，看你做的结果之后再做决定，同时我再给你叫个专家过来 @atlanticwi
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

rebornpro
2楼2012-05-09 23:06:49
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
★ ★
小丹木木: 金币+2, 这个也是专家了 2012-05-10 13:44:25
嗯........................
我不是专家啦
楼上专家解释很清楚了
我个人感觉普通的Taq酶对体系及成分要求并不是特别严谨 我7uL体系（本应该10uL的）P成功过 有人错拿NaOH代替蒸馏水也P成功过
但是高保真系列酶我就说不上了................
如果你做错了 对于PCR这种需要反复尝试的实验 先将错就错做下去 出了看结果再说 其实我们都曾心里自己安慰自己：“说不定结果更好了呢”
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

rebornpro
Let God do with it as He wills
3楼2012-05-09 23:16:20
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rebornpro

铁虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 孙启亮 at 2012-05-09 23:06:49:
首先你这种情况还真没碰到过。PBS和无酶水的区别是多了几种离子，钾离子，钠离子，氯离子等等。但是我记得这些离子不会对体系中酶的活性产生影响，倒是在对产物跑胶的时候会产生影响。其次，PBS的PH好像是在7.3左 ...

谢谢解答
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4楼2012-05-10 08:37:49
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rebornpro

铁虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-05-09 23:16:20:
嗯........................
我不是专家啦
楼上专家解释很清楚了
我个人感觉普通的Taq酶对体系及成分要求并不是特别严谨 我7uL体系（本应该10uL的）P成功过 有人错拿NaOH代替蒸馏水也P成功过
但是高保真系列 ...

也谢谢你的解答
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5楼2012-05-10 08:38:04
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hyacinth326

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-10 13:44:38
楼上两位专家都分析的很好啊，其实这种情况，就p一下试试呗，如果p不出来再重新做呗，只是有一样，有些离子的存在可能在一定程度上影响聚合酶的保真度，所以还是要谨慎
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6楼2012-05-10 09:05:30
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