应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 定量PCR读取荧光值的步骤需要保持多长时间？
51/1返回列表
查看: 2795  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

tingspdf

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 定量PCR读取荧光值的步骤需要保持多长时间？

各位朋友好！最近做定量PCR遇到了点问题，仪器是ABI7300，在延伸步骤读取荧光值会有非特征峰，所以想在后面加一步高温步骤（约80-85度）读取荧光值，想问一下通常这一步需要保持多长时间？谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-05-09 09:19:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tingspdf

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-05-09 21:21:18:
这样是不行的哦。有非特异峰就代表有非特异扩增，如果你是两步法（退火、延伸用同一个温度），可以改为传统的三步法以增加特异性。也可以尝试提高退火温度。
如果你用的荧光染料是sybr green，只能在延伸结束时检 ...

版主您好，我用的确实是SYBR green, 三步法的结果不太理想，标线斜率-2.22...相当于极其高的扩增效率，遂改成两步法在实验，我们周围有加一步专门检测荧光的步骤，效果还不错，呵呵，所以才在此询问一下各位。
赞一下 回复此楼
6楼2012-05-12 14:53:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

cheng_xiao

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-09 13:55:14
tingspdf: 金币+2 2012-05-12 14:51:15
我觉得按照你实验的步骤设计吗，30s就行啊，或者短一点，15s左右，这一步只是读数据，关键还是你设计的温度，从溶解曲线可以看出你温度越高，值就越小这是一定的，所以温度是很重要的。实验顺利啊
赞一下(1人) 回复此楼
我努力我奋斗我成功
2楼2012-05-09 10:44:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 斑斑很辛苦哈 2012-05-10 13:40:22
tingspdf: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-05-12 14:56:12
这样是不行的哦。有非特异峰就代表有非特异扩增，如果你是两步法（退火、延伸用同一个温度），可以改为传统的三步法以增加特异性。也可以尝试提高退火温度。
如果你用的荧光染料是sybr green，只能在延伸结束时检测荧光信号，额外增加一个专门检测荧光的步骤是不可行的哦。
赞一下 回复此楼
3楼2012-05-09 21:21:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
★ ★
西瓜: 金币+2, 学习了哈~ 2012-05-10 03:59:58
引用回帖:
3楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-05-09 21:21:18:
这样是不行的哦。有非特异峰就代表有非特异扩增，如果你是两步法（退火、延伸用同一个温度），可以改为传统的三步法以增加特异性。也可以尝试提高退火温度。
如果你用的荧光染料是sybr green，只能在延伸结束时检 ...

西瓜大哥哦
有非特异峰值还有可能是管子的问题哦 我们经常遇到的 有些公司的96孔板会有非特异性扩增 换成好些的8-strips tube就没啥问题了
赞一下(1人) 回复此楼
Let God do with it as He wills
4楼2012-05-09 23:48:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 322求调剂 +3 X123- 2026-03-14 3/150 2026-03-21 18:40 by ColorlessPI
[考研] 277材料科学与工程080500求调剂 +6 自由煎饼果子 2026-03-16 6/300 2026-03-21 17:21 by 学员8dgXkO
[考研] 生物学一志愿985，分数349求调剂 +3 zxts12 2026-03-21 3/150 2026-03-21 16:34 by 33来了真来了
[考研] 286分人工智能专业请求调剂愿意跨考！ +4 lemonzzn 2026-03-17 7/350 2026-03-21 16:09 by lemonzzn
[考研] 一志愿中国石油大学（华东） 本科齐鲁工业大学 +3 石能伟 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:22 by JourneyLucky
[考研] 328求调剂，英语六级551，有科研经历 +4 生物工程调剂 2026-03-17 8/400 2026-03-21 02:12 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武理材料305分求调剂 +6 想上岸的鲤鱼 2026-03-18 7/350 2026-03-21 01:03 by JourneyLucky
[考研] 354求调剂 +5 Tyoumou 2026-03-18 8/400 2026-03-21 00:35 by JourneyLucky
[考研] 材料专业求调剂 +6 hanamiko 2026-03-18 6/300 2026-03-21 00:24 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +5 冬十三 2026-03-18 5/250 2026-03-21 00:16 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 阿姐阿姐家啊 2026-03-18 3/150 2026-03-20 23:24 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西安交通大学 学硕 354求调剂211或者双一流 +3 我想要读研究生 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:13 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 @taotao 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:35 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南理工085701环境302求调剂院校 +3 葵梓卫队 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:28 by zhukairuo
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +7 困于星晨 2026-03-17 9/450 2026-03-20 17:38 by 无懈可击111
[考研] 0703化学调剂 +5 pupcoco 2026-03-17 8/400 2026-03-19 13:58 by houyaoxu
[考研] 材料专硕306英一数二 +10 z1z2z3879 2026-03-16 13/650 2026-03-18 14:20 by 007_lilei
[考研] 有没有道铁/土木的想调剂南林，给自己招师弟中～ +3 TqlXswl 2026-03-16 7/350 2026-03-17 15:23 by TqlXswl
[考研] 0856求调剂 +3 刘梦微 2026-03-15 3/150 2026-03-16 10:00 by houyaoxu
[考研] 085601材料工程315分求调剂 +3 yang_0104 2026-03-15 3/150 2026-03-15 10:58 by peike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭