24小时热门版块排行榜    

查看: 2787  |  回复: 12
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

applewxy

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
反复冻融也有可能导致蛋白活性下降的,有的酶就特别敏感,冻两次就酶活性了。粗提的酶浓度怎么算的?准么
我会绕一个圈,走回到实验室
7楼2012-05-09 15:12:07
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

hyacinth326

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-09 13:46:02
蛋白没有活性有可能是表达了包涵体,一般情况下这种反复冻融应该不会失活吧,我们超声裂解有时候条件挺恶劣的也都还好,你可以优化一下表达条件,或者是换别的载体试一下
2楼2012-05-08 20:52:57
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 专家考核 2012-05-09 13:46:12
如楼上所说,完全没有活性很可能是形成包涵体。
3楼2012-05-08 22:43:42
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 呵呵,欢迎欢迎,丽美眉又回来了哈 2012-05-09 13:47:20
西瓜: 金币+2, MolEPI+1, 消失了一段时间啊。回答很好,授予EPI! 2012-05-09 19:02:22
applewxy: 金币+4, ★★★很有帮助 2012-05-14 22:21:49
出现包涵体很容易被发现也很容易纯化出来,若有包涵体的话你就先变性再复性就是了。Purification of inclusion bodies and refolding of proteins protocol:http://ishare.iask.sina.com.cn/f/18503995.html
但是原核细胞表达的蛋白质失活可不是仅有形成包涵体一种原因。反复冻融可能引起蛋白质的再折叠和冷变性,在一些时候会引起蛋白质的二硫键断裂,虽然二硫键在空气中能够自动氧化,但是蛋白质冷变性后且二硫键断裂开再重新形成可不一定会形成原来天然蛋白质的二硫键,因为原来的细胞内的折叠环境已经不存在了。同样理由,冷变性也不是总是在到室温后就一定复性。检测方法很简单,用红外光谱和紫外光谱同时测定一下你表达的蛋白质与标准品的光谱是否有差异。单独用红外光谱可能会显示二级结构相同让人误以为折叠形态没有改变,实际上可能是拓扑结构发生了改变,即二级结构的种类、数量和彼此位置改变了,这在红外光谱测定的二级结构中显示不出来,单独用紫外光谱可能不是很精确,因为溶液状态,有比较稀,同样折叠的蛋白质折叠态的三级结构可能略有微小差异。
再有考虑,原核生物中的蛋白质没有翻译后修饰,这样也不会形成活性蛋白质。测一下分子量就能检测出来。
另外考虑是否分离时除去了活性辅酶,把它们加回去再测活性。
是否有蛋白质降解和抑制剂。
4楼2012-05-08 23:08:19
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 280求调剂 +11 咕噜晓晓 2026-03-18 12/600 2026-03-21 22:40 by ACS Nano——
[考研] 考研调剂 +3 呼呼?~+123456 2026-03-21 3/150 2026-03-21 20:04 by 无际的草原
[考研] 326求调剂 +4 mlpqaz03 2026-03-15 4/200 2026-03-21 19:10 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
[考研] 工科0856求调剂 +3 沐析汀汀 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:30 by 学员8dgXkO
[考研] 313求调剂 +4 肆叁贰壹22 2026-03-19 4/200 2026-03-21 17:33 by ColorlessPI
[考研] 302求调剂 +12 呼呼呼。。。。 2026-03-17 12/600 2026-03-21 17:29 by ColorlessPI
[考研] 能源材料化学课题组招收硕士研究生8-10名 +5 脱颖而出 2026-03-16 15/750 2026-03-21 10:16 by 脱颖而出
[考研] 083200学硕321分一志愿暨南大学求调剂 +3 innocenceF 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:35 by JourneyLucky
[考研] 二本跨考郑大材料306英一数二 +3 z1z2z3879 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:29 by JourneyLucky
[考研] 南京大学化学376求调剂 +3 hisfailed 2026-03-19 6/300 2026-03-20 23:43 by hisfailed
[考研] 330求调剂 +4 小材化本科 2026-03-18 4/200 2026-03-20 23:13 by JourneyLucky
[考研] 329求调剂 +9 想上学吖吖 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:01 by luoyongfeng
[考研] 一志愿中南化学(0703)总分337求调剂 +8 niko- 2026-03-19 9/450 2026-03-20 21:57 by luoyongfeng
[考研] 求调剂一志愿南京航空航天大学289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-20 21:34 by JourneyLucky
[考研] 260求调剂 +3 朱芷琳 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:35 by 学员8dgXkO
[考研] 招收调剂硕士 +4 lidianxing 2026-03-19 12/600 2026-03-20 12:25 by lidianxing
[考研] 一志愿985,本科211,0817化学工程与技术319求调剂 +10 Liwangman 2026-03-15 10/500 2026-03-19 10:25 by 无际的草原
[考研] 本科郑州大学物理学院,一志愿华科070200学硕,346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
[考研] 070300化学学硕求调剂 +6 太想进步了0608 2026-03-16 6/300 2026-03-16 16:13 by kykm678
信息提示
请填处理意见