应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达，蛋白活性问题
51/1返回列表
查看: 2756  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

applewxy

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-05-08 20:39:12
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

second

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-09 13:47:36
原核表达缺乏转录后的加工修饰，氨基酸序列也不能形成正确的空间结构，表达的蛋白本来就是没有活性的呀...
赞一下 回复此楼
5楼2012-05-09 00:26:49
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

hyacinth326

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-09 13:46:02
蛋白没有活性有可能是表达了包涵体，一般情况下这种反复冻融应该不会失活吧，我们超声裂解有时候条件挺恶劣的也都还好，你可以优化一下表达条件，或者是换别的载体试一下
赞一下 回复此楼
2楼2012-05-08 20:52:57
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 专家考核 2012-05-09 13:46:12
如楼上所说，完全没有活性很可能是形成包涵体。
赞一下 回复此楼
3楼2012-05-08 22:43:42
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 呵呵，欢迎欢迎，丽美眉又回来了哈 2012-05-09 13:47:20
西瓜: 金币+2, MolEPI+1, 消失了一段时间啊。回答很好，授予EPI！ 2012-05-09 19:02:22
applewxy: 金币+4, ★★★很有帮助 2012-05-14 22:21:49
出现包涵体很容易被发现也很容易纯化出来，若有包涵体的话你就先变性再复性就是了。Purification of inclusion bodies and refolding of proteins protocol：http://ishare.iask.sina.com.cn/f/18503995.html
但是原核细胞表达的蛋白质失活可不是仅有形成包涵体一种原因。反复冻融可能引起蛋白质的再折叠和冷变性，在一些时候会引起蛋白质的二硫键断裂，虽然二硫键在空气中能够自动氧化，但是蛋白质冷变性后且二硫键断裂开再重新形成可不一定会形成原来天然蛋白质的二硫键，因为原来的细胞内的折叠环境已经不存在了。同样理由，冷变性也不是总是在到室温后就一定复性。检测方法很简单，用红外光谱和紫外光谱同时测定一下你表达的蛋白质与标准品的光谱是否有差异。单独用红外光谱可能会显示二级结构相同让人误以为折叠形态没有改变，实际上可能是拓扑结构发生了改变，即二级结构的种类、数量和彼此位置改变了，这在红外光谱测定的二级结构中显示不出来，单独用紫外光谱可能不是很精确，因为溶液状态，有比较稀，同样折叠的蛋白质折叠态的三级结构可能略有微小差异。
再有考虑，原核生物中的蛋白质没有翻译后修饰，这样也不会形成活性蛋白质。测一下分子量就能检测出来。
另外考虑是否分离时除去了活性辅酶，把它们加回去再测活性。
是否有蛋白质降解和抑制剂。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2012-05-08 23:08:19
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 欢迎采矿、地质、岩土、计算机、人工智能等专业的同学报考 +3 pin8023 2026-02-28 5/250 2026-03-02 00:24 by 花YOU重开日
[考研] 279求调剂 +3 dua1 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:23 by 大脸蛋子
[考研] 284求调剂 +8 天下熯 2026-02-28 8/400 2026-03-02 00:15 by 暮雨星晴
[基金申请] 本子写完了，给DS兄弟看了，得了92分 +3 Doma 2026-03-01 7/350 2026-03-02 00:00 by jnzsy
[考研] 材料学硕318求调剂 +11 February_Feb 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:53 by ccp273206157
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-01 5/250 2026-03-01 23:31 by L135790
[考研] 江苏省农科院招调剂1名 +3 Qwertyuop 2026-03-01 3/150 2026-03-01 23:18 by aaadim
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +6 礼堂丁真258 2026-02-28 8/400 2026-03-01 22:50 by jian_
[基金申请] 成果系统访问量大，请一小时后再尝试。---NSFC啥时候好哦，已经两天这样了 +4 NSFC2026我来了 2026-02-28 4/200 2026-03-01 22:37 by 铁门栓
[考研] 275求调剂 +3 明远求学 2026-03-01 3/150 2026-03-01 22:29 by 刘兵
[考研] 高分子化学与物理调剂 +6 好好好1233 2026-02-28 12/600 2026-03-01 19:48 by 好好好1233
[考研] 材料学调剂 +9 提神豆沙包 2026-02-28 11/550 2026-03-01 18:15 by ms629
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +4 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 7/350 2026-03-01 16:52 by caszguilin
[基金申请] 刚录用，没有期刊号，但是在线可看的论文可以放为代表作吗 10+3 arang1 2026-03-01 3/150 2026-03-01 16:43 by babero
[考研] 307求调剂 +5 wyyyqx 2026-03-01 5/250 2026-03-01 15:21 by Fff-1
[考研] 课题组接收材料类调剂研究生 +3 gaoxiaoniuma 2026-02-28 4/200 2026-03-01 14:30 by jjj三跨
[考研] 295复试调剂 +3 简木ChuFront 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:27 by zzxw520th
[考研] 调剂 +3 简木ChuFront 2026-02-28 3/150 2026-03-01 11:46 by 王伟要上岸啊
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧？ +5 ieewxg 2026-02-25 6/300 2026-03-01 00:10 by addressing
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭