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wushuwei1104

银虫 (小有名气)

[求助] RACE求助！！！

最近在做3‘RACE，听师兄说之前他做的时候，用Outer primer 做PCR后的胶图有类似涂抹状的拖带！  小弟也做了一次，发现用Outer primer 做PCR后的胶图是这个样子的，  请求各位RACE高手，看看这样的能不能接着做3’RACE的inner primer !!
  谢谢各位大侠了！！！

6个泳道中的均是用outer primer 做的3’RACE。
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勤能补拙
1楼 2012-05-05 20:36:49
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wcwluwei

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
4楼2012-05-06 21:26:20
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XOooZzz

银虫 (小有名气)
不清楚状况，感觉可以测个序再说。lz用的是哪种race方法？
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7楼2012-05-06 22:44:40
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XOooZzz

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
lz做了inner primer了？建议用单引物做阴性对照，确认不是单引物扩增后，测一次序看看结果。
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9楼2012-05-07 10:10:56
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hellolin

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wushuwei1104 at 2012-05-06 21:35:04:
做了nest pcr,得到了单一条带，可是太小了，还不到500bp，根据基因比对结果，感觉应该是1000多bp的。是不是错配！还是什么东西？

你可以用引物验证一下一轮有没有扩出你的目的基因，然后在接着做nest pcr。如果一轮产物有你的目的基因的话可以试着延长一下延伸时间。3‘RACE的话后面的UTR可能会比你预期的长
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scienceguy
11楼2012-05-07 18:38:28
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XOooZzz

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by wushuwei1104 at 2012-05-07 17:13:48:
做了inner primer了！怎么用单引物做对照，是用inner primer吗?

就是分别只加正向引物和只加反向引物做次pcr看看，以防你的那个条带只不过是单引物扩增。
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12楼2012-05-07 23:22:23
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普通回帖

hellolin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wushuwei1104: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-05-07 18:14:12
可以啊，为什么不可以啊？？
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scienceguy
2楼2012-05-05 21:23:59
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hellolin at 2012-05-05 21:23:59:
可以啊，为什么不可以啊？？

谢谢这位仁兄！
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勤能补拙
3楼2012-05-06 14:37:20
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wcwluwei at 2012-05-06 21:26:20:
这个拖带可以做一下nest pcr的

我做了nest pcr了，虽然有明显的条带（单条带），但是很小 还不到500bp，感觉应该在1000多的。是不是错配？
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勤能补拙
5楼2012-05-06 21:33:09
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hellolin at 2012-05-05 21:23:59:
可以啊，为什么不可以啊？？

做了nest pcr,得到了单一条带，可是太小了，还不到500bp，根据基因比对结果，感觉应该是1000多bp的。是不是错配！还是什么东西？
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勤能补拙
6楼2012-05-06 21:35:04
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by XOooZzz at 2012-05-06 22:44:40:
不清楚状况，感觉可以测个序再说。lz用的是哪种race方法？

TaKaRa 公司的3‘-Full RACE Core set Ver 2.0 试剂盒
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勤能补拙
8楼2012-05-07 08:08:55
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by XOooZzz at 2012-05-07 10:10:56:
lz做了inner primer了？建议用单引物做阴性对照，确认不是单引物扩增后，测一次序看看结果。

做了inner primer了！怎么用单引物做对照，是用inner primer吗?
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勤能补拙
10楼2012-05-07 17:13:48
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