应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 双酶切看不到小片段，为什么？
51/1返回列表
查看: 3380  |  回复: 19
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

fannyzehong

银虫 (初入文坛)

[求助] 双酶切看不到小片段，为什么？

质粒双酶切看不到小片段，是怎么回事？是双酶切失败了吗？请各位大侠帮忙分析分析，谢谢!
泳道1：质粒；2：BamHI单酶切；3：NcoI单酶切；4：BamHI,NcoI双酶切
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2012-04-27 17:29:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
fannyzehong: 金币+1 2012-04-28 17:14:21
引用回帖:
8楼: Originally posted by tyw2623 at 2012-04-28 10:35:10:
质粒酶切前比酶切后跑的要慢，这个不正确的 ，一般都是环状比线性的要快，，lz可做了菌液pcr？是阳性吗？

也有可能是开环的啊，就跑胶图来看应该是切开了，不论单酶切还是双酶切！
赞一下 回复此楼
9楼2012-04-28 10:56:21
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答

cxfans

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我觉得是不是你用的酶切缓冲液不是两者兼容的 建议试一下连续单酶切试试，只是有点耗时
赞一下 回复此楼
2楼2012-04-27 21:40:21
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

第五平原

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
fannyzehong: 金币+1 2012-04-28 17:13:36
yqbter: 金币+1, 鼓励发帖交流！ 2012-06-03 10:18:35
我自己在实验中也遇到过这种情况，双酶切后只能看到载体片段而看不见目标基因片段，据师兄说是因为如果载体的分子量是目标基因分子量的几百倍，同样拷贝数的情况下载体与基因的亮度也呈相应的比例，也就是说载体会远远亮于基因，不知道你具体试验中是什么情况，希望这个回答对你有所帮助
赞一下 回复此楼
勤勉
3楼2012-04-27 22:33:07
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

淘气维尼89

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
从图示来看，应该是切了一部分吧，毕竟模板质粒跑的最慢。但是你的三种酶怎么跑出的条带都在一条线上，是不是酶的活力不够，或是切出来的片段被破坏了，显示不出来？双酶切的Buffer估计不一样吧？
赞一下 回复此楼
4楼2012-04-27 23:39:21
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭