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fannyzehong

银虫 (初入文坛)

[求助] 双酶切看不到小片段,为什么?

质粒双酶切看不到小片段,是怎么回事?是双酶切失败了吗?请各位大侠帮忙分析分析,谢谢!
泳道1:质粒;2:BamHI单酶切;3:NcoI单酶切;4:BamHI,NcoI双酶切
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


fannyzehong: 金币+1 2012-04-28 17:14:21
引用回帖:
8楼: Originally posted by tyw2623 at 2012-04-28 10:35:10:
质粒酶切前比酶切后跑的要慢,这个不正确的 ,一般都是环状比线性的要快,,lz可做了菌液pcr?是阳性吗?

也有可能是开环的啊,就跑胶图来看应该是切开了,不论单酶切还是双酶切!
9楼2012-04-28 10:56:21
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cxfans

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我觉得是不是你用的酶切缓冲液不是两者兼容的 建议试一下连续单酶切试试,只是有点耗时
2楼2012-04-27 21:40:21
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第五平原

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
fannyzehong: 金币+1 2012-04-28 17:13:36
yqbter: 金币+1, 鼓励发帖交流! 2012-06-03 10:18:35
我自己在实验中也遇到过这种情况,双酶切后只能看到载体片段而看不见目标基因片段,据师兄说是因为如果载体的分子量是目标基因分子量的几百倍,同样拷贝数的情况下载体与基因的亮度也呈相应的比例,也就是说载体会远远亮于基因,不知道你具体试验中是什么情况,希望这个回答对你有所帮助
勤勉
3楼2012-04-27 22:33:07
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淘气维尼89

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
从图示来看,应该是切了一部分吧,毕竟模板质粒跑的最慢。但是你的三种酶怎么跑出的条带都在一条线上,是不是酶的活力不够,或是切出来的片段被破坏了,显示不出来?双酶切的Buffer估计不一样吧?
4楼2012-04-27 23:39:21
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