| 查看: 3044 | 回复: 17 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
thestormcong银虫 (小有名气)
|
[求助]
red基因敲除
|
|
|
大家好，最近做red基因敲除，遇到困难，特地请求高人指点。 我将带有同源臂的打靶片段电转化入宿主细胞中，筛选转化子（我用的是卡纳抗性）。对转化子进行菌落pcr，菌落pcr的引物设计在待敲除基因的上下游。我挑了6个转化子，也做了阳性对照（原始株）。结果是有一个有条带，大小跟野生株的一样。另外5个都没有条带。我很纳闷！理论上来说的话应该都能扩增出条带，只是大小不同，可是为什么我有5个都没有能够扩增出条带呢？ 自己也分析了一下原因。 1：有可能是其他带有卡纳抗性的菌株的污染。可是我对这些菌株的别的基因进 行过菌落pcr（实验室有做该细菌别的基因），都是有条带的，表明这些还是我的菌株。 2：会不会是里面的同源交换出错了呢？但是细菌还是有卡纳抗性的。也对这个细菌提过质粒，没有发现质粒条带。 3：菌落pcr的问题吗？可是每一次的阳性对照都很正常啊。 综上所述，希望得到有经验的虫友的帮助，万分感谢！！！！！！！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有214人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- red基因敲除转化子
已经有3人回复
- 做过用同源重组进行基因敲出的朋友请进，PCR做不出来！！
已经有16人回复
- 大肠杆菌基因重组时PKD46高温怎么都消除不了
已经有25人回复
- 目的基因导入到受体细胞会发生基因重组吗？说说原因！
已经有6人回复
- 【求助/交流】关于基因敲除的方法
已经有18人回复
- 【求助/交流】芽孢杆菌属的基因敲除方法
已经有12人回复
- 【求助/交流】微生物基因敲除请进
已经有8人回复
- 【求助/交流】请教关于大肠杆菌lamda RED重组问题
已经有23人回复
fwks3518
木虫 (正式写手)
- 应助: 28 (小学生)
- 金币: 4696.9
- 红花: 1
- 帖子: 368
- 在线: 146.1小时
- 虫号: 589028
- 注册: 2008-08-29
- 专业: 微生物遗传学
4楼2012-04-26 08:44:38
张宏宇123
金虫 (著名写手)
- 应助: 52 (初中生)
- 金币: 388.9
- 帖子: 1084
- 在线: 93.8小时
- 虫号: 1766866
- 注册: 2012-04-20
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
2楼2012-04-25 22:45:27
thestormcong
银虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 462.1
- 红花: 3
- 帖子: 103
- 在线: 109.2小时
- 虫号: 1410070
- 注册: 2011-09-20
- 专业: 生物化学
3楼2012-04-25 23:18:54
renqing001
木虫 (著名写手)
- 应助: 29 (小学生)
- 金币: 2758
- 散金: 178
- 红花: 1
- 帖子: 1366
- 在线: 98.2小时
- 虫号: 654048
- 注册: 2008-11-14
- 性别: GG
- 专业: 发育生物学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
thestormcong: 金币+5 2012-04-26 15:09:45
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-04-26 16:03:21
感谢参与，应助指数 +1
thestormcong: 金币+5 2012-04-26 15:09:45
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-04-26 16:03:21
| 同源重组只发生在一条染色体，筛选引物应该设计在替换上去的卡那抗性基因上和短臂的外侧才合适，而不是待敲除的基因两侧，再有不要盲目相信菌落PCR，还是提DNA再做吧！ |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
thestormcong5楼2012-04-26 09:20:21
