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自己的滋味

新虫 (初入文坛)

[求助] rt-pcr 复孔之间的目的基因表达不均问题

做了多次rt-pcr,做之前,用trizol法提的RNA ,RNA 的260/280 值都在1.8~2.0 之间,用的toyobo的反转录试剂盒反转,之后上样跑pcr,可是PCR的结果总是有问题,主要问题如下: A、B、C 三组,每组各设三个复孔(A1A2A3  B1B2B3  C1C2C3)各复孔之间,有一个往往孔比其他两孔,目的基因表达水平要高,ct值 另外两个孔要低一般都早两个循环~但actin的ct值每孔之间差异不大。例如:目的基因A1>A2A3(A2A3大致相同),Ct值:A1

[ Last edited by 自己的滋味 on 2012-4-18 at 21:49 ]
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fwks3518

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
混体系的时候统一加模板,才能保证结果的平行性。
2楼2012-04-19 08:59:44
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自己的滋味

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by fwks3518 at 2012-04-19 08:59:44:
混体系的时候统一加模板,才能保证结果的平行性。

关键是,并不是单一的模板啊,一个处理组在铺板时,铺的就是3个复孔,所以经过提rna,反转后,就是三个模板,即A1A2A3,怎么混一块?
3楼2012-04-19 23:07:37
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fwks3518

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
自己的滋味: 金币+2, 有帮助, 谢谢 2012-04-23 10:43:40
引用回帖:
3楼: Originally posted by 自己的滋味 at 2012-04-19 23:07:37:
关键是,并不是单一的模板啊,一个处理组在铺板时,铺的就是3个复孔,所以经过提rna,反转后,就是三个模板,即A1A2A3,怎么混一块?

同一个模板混体系,三个模板混3个体系
4楼2012-04-21 11:07:34
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