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xiao7_dd

铁虫 (初入文坛)

[求助] 第一次提RNA 电泳结果只有两条带 求前辈解释~~

今天第一次提得鸡的垂体的RNA ，第一道是DL2000MARKER，第2和第3道是相同的样品 不同的TRIZOL抽提的结果（其中第2道是新买的TRIZOL 第3道是一年多前的 只是做一下对比看以前的是否失效了）；第4和第5道同上。但是结果都只有两条带，而且第一条条带上方还有2条淡淡地杂带是什么？请前辈帮我分析下是降解了吗？谢谢啦~！

RNA
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1楼 2012-04-16 20:43:20
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xiao7_dd

铁虫 (初入文坛)
之前没有仔细看 刚注意到最下面那个很模糊的条带  不会就是5S吧？
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2楼2012-04-16 21:48:20
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-04-17 13:40:11
提的质量不错。
带型sharp，没啥降解；但是DNA残留明显，根据你的下游需求，可以去除一下DNA污染。
也不是每次都是见到28s的，你这两条根据位置应该是18s，5s。
18s上面那浅浅的带应该是28s吧
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xiao7_dd
3楼2012-04-17 08:41:29
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karin

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-04-17 13:40:22
两条亮带是28s、18s，亮度应该是28s的是18s的两倍，但实际做起来很难达到。看你的1和3泳道比较好，28s的带比18s的带亮，降解不算严重。许多情况下5s的带是看不到的。至于第一条条带上方的2条淡淡地杂带是不是DNA啊。我以前是用试剂盒提的，没有杂带。
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

xiao7_dd
坚持就是胜利
4楼2012-04-17 09:24:49
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qdlinxiaofei

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-04-17 13:40:36
xiao7_dd: 金币+20, ★★★★★最佳答案, 解释的很详细 谢谢啊！ 2012-04-17 13:41:17
我跟老师 一起给你看了一下  最上边的是DNA污染，下边的两三条带是糖 蛋白的污染 最亮的是28s 和18s 你提的RNA浓度很好 就是污染比较厉害 如果只是转录的话 应该可以 但是要是有更高的要求 最好是DNA酶再消化  提纯一下
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5楼2012-04-17 10:11:46
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xiao7_dd

铁虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by gaoyang636 at 2012-04-17 08:41:29:
提的质量不错。
带型sharp，没啥降解；但是DNA残留明显，根据你的下游需求，可以去除一下DNA污染。
也不是每次都是见到28s的，你这两条根据位置应该是18s，5s。
18s上面那浅浅的带应该是28s吧

谢谢帮助 本来想给你们都给分的 发现我没有这个权限~呵呵！
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6楼2012-04-17 13:46:22
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xiao7_dd

铁虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by karin at 2012-04-17 09:24:49:
两条亮带是28s、18s，亮度应该是28s的是18s的两倍，但实际做起来很难达到。看你的1和3泳道比较好，28s的带比18s的带亮，降解不算严重。许多情况下5s的带是看不到的。至于第一条条带上方的2条淡淡地杂带是不是DNA啊 ...

谢谢帮助！ 想给你们都给分的 才发现我没有这个权限~！那就送鲜花啦~
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7楼2012-04-17 13:47:32
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脱水拂空

铜虫 (正式写手)
★
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-17 19:13:54
RNA里面残余糖类和其他物质太多 可以再抽提一下 把多余的其他物质去除 质量还可以 用于做一般的RT-PCR 还可以
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8楼2012-04-17 15:06:21
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dovekaoyan

木虫 (正式写手)
总体来说，提的不错，下面模糊那条是5S的，但是上方有DNA污染，如果你下面要做荧光定量的话，建议去除一下
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9楼2012-04-19 09:38:12
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