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kabuqinuo89

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[求助] TA克隆为什么总是假阳性啊？已有1人参与

我这一阵在做TA克隆，切胶回收的片段条带很清晰，但是每次连接都是假阳性或者是连不上，这是什么原因呢，求助啊！

切胶回收后的条带

第二个孔为目的条带，后面为菌落PCR结果，求解

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1楼 2012-04-16 16:20:18

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open3377

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【答案】应助回帖

★ ★
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kabuqinuo89: 金币+2 2012-04-18 10:57:01

1. 用普通TAQ酶，别浪费功夫加什么A
2. 做个对照
3.检查下抗生素，板超过24h，长出来的就别要了
4. 向别人借过感受态试试
5.PCR检测至少3遍才能确定吧，即使有，也可能扩不何处来
6. 使用载体引物，你胶上乱起八糟的，用载体引物即使空载还能看到个判断
建议你载体引物和目的条带引物同时扩，应该能找出问题所在