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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » TA克隆为什么总是假阳性啊？
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kabuqinuo89

新虫 (小有名气)

[求助] TA克隆为什么总是假阳性啊？ 已有1人参与

我这一阵在做TA克隆，切胶回收的片段条带很清晰，但是每次连接都是假阳性或者是连不上，这是什么原因呢，求助啊！

切胶回收后的条带



第二个孔为目的条带，后面为菌落PCR结果，求解
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1楼 2012-04-16 16:20:18
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open3377

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kabuqinuo89: 金币+2 2012-04-18 10:57:01
1. 用普通TAQ酶，别浪费功夫加什么A
2. 做个对照
3.检查下抗生素，板超过24h，长出来的就别要了
4. 向别人借过感受态 试试
5.PCR检测至少3遍才能确定吧，即使有，也可能扩不何处来
6. 使用载体引物，你胶上乱起八糟的，用载体引物即使空载还能看到个判断
   建议你载体引物和目的条带引物同时扩，应该能找出问题所在
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18楼2012-04-17 23:27:40
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zhang8826857

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 欢迎斑斑常来啊~ 2012-04-16 21:22:42
kabuqinuo89: 金币+1 2012-04-17 17:14:11
你有没有做一步加A的操作呀？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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好孩子！
2楼2012-04-16 18:18:52
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kabuqinuo89

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhang8826857 at 2012-04-16 18:18:52:
你有没有做一步加A的操作呀？

我是用的Taq酶，应该不用再加A吧，不过我打算明天再加一下A试试
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2012-04-16 21:30:43
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zhang8826857

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by kabuqinuo89 at 2012-04-16 21:30:43:
我是用的Taq酶，应该不用再加A吧，不过我打算明天再加一下A试试

哦，用的taq酶呀，那就不用加A啦。可能是连接的时间不够？而且连接的温度不能高于25度，你用的是什么T载体？takara的吗？
赞一下(1人) 回复此楼
好孩子！
4楼2012-04-16 22:57:26
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