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syn1985

木虫 (正式写手)

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[交流] 链霉菌基因敲除怪现象

我做链霉菌in frame deletion做了好几个月了这月初用菌落PCR方法检测到了突变株真的好开心然后就发酵 LCMS检测发现产物还在我就觉得很郁闷然后我重新分了单克隆取单克隆的孢子做了菌落PCR PCR检测发现扩增结果比野生小大小和预期的也一样测序结果也是对的可是用目标基因的特异性引物扩增竟然也能扩出目的大小条带这是怎么回事这是我检测手段有问题还是这个菌里面有另一个拷贝啊

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1楼 2012-04-16 14:33:52

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syn1985

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引用回帖:

17楼: Originally posted by srlee at 2012-04-19 19:06:07:
1）我的意思是你的菌可能还是杂合体，既有WT也有mutant，或者说你还没有纯化好，或者你能确认你挑的单克隆没有问题吗？
2)我建议你用这个克隆的孢子（确认是孢子）再划一下平板，待长出单克隆后再验证。
3）当 ...

1）我一开始怀疑是不是里面混了WT的所以就刮孢子做了孢子悬液然后稀释涂了板子所以挑的单克隆是没有问题的
2）我明天按照你说的再重新划一下板子再分离一下看看
3）按照你这种验证方法如果得到的检测结果是一样的这说明是多拷贝还是啥我不太明白这种检测得出的结果该如何分析是否有另一个拷贝
谢谢了！