应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 链霉菌基因敲除怪现象
51/1返回列表
查看: 4076  |  回复: 32
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

syn1985

木虫 (正式写手)

[交流] 链霉菌基因敲除怪现象

我做链霉菌in frame deletion做了好几个月了 这月初用菌落PCR方法检测到了突变株真的好开心 然后就发酵 LCMS检测发现产物还在 我就觉得很郁闷 然后我重新分了单克隆 取单克隆的孢子做了菌落PCR PCR检测发现扩增结果比野生小 大小和预期的也一样 测序结果也是对的 可是用目标基因的特异性引物扩增竟然也能扩出目的大小条带 这是怎么回事 这是我检测手段有问题还是这个菌里面有另一个拷贝啊
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

iijs

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼2012-04-16 14:33:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

syn1985

木虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
17楼: Originally posted by srlee at 2012-04-19 19:06:07:
1）我的意思是你的菌可能还是杂合体，既有WT也有mutant，或者说你还没有纯化好，或者你能确认你挑的单克隆没有问题吗？
2)我建议你用这个克隆的孢子（确认是孢子）再划一下平板，待长出单克隆后再验证。
3）当 ...

1）我一开始怀疑是不是里面混了WT的 所以就刮孢子做了孢子悬液然后稀释涂了板子 所以挑的单克隆是没有问题的
2）我明天按照你说的再重新划一下板子 再分离一下看看
3）按照你这种验证方法 如果得到的检测结果是一样的 这说明是多拷贝还是啥 我不太明白这种检测得出的结果该如何分析是否有另一个拷贝
谢谢了！
赞一下 回复此楼
18楼2012-04-19 20:09:06
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 33 个回答

iijs

金虫 (正式写手)
送鲜花一朵
敲除得多长时间啊
赞一下 回复此楼
2楼2012-04-16 15:55:42
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

syn1985

木虫 (正式写手)
从构建载体开始到筛到突变株 顺的话2个月吧
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2012-04-16 16:02:20
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zct2008

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
syn1985: 金币+3 2012-04-16 18:41:03
zhang8826857: 金币+3, 分析的有道理 2012-04-16 23:12:32
用目标基因的特异性引物扩增也能扩出目的大小条带，有两种可能：一种可能是非特异性扩增，这个应该好排除，可以通过测序等。另一种可能就是这一个基因在你的这个菌里面有另一个拷贝，当然前提是你要确定你的这个菌是纯的，没有污染（指的是突变株里面混杂有野生型菌株）。希望对你有用。
赞一下 回复此楼
4楼2012-04-16 16:56:27
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 33 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复(可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭