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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 能不能只用一条引物做不对称PCR？
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真水无香1709

铜虫 (小有名气)

[交流] 能不能只用一条引物做不对称PCR？

rt，有没有直接用一条引物做不对称PCR的？
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1楼 2012-04-14 09:30:22
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真水无香1709

铜虫 (小有名气)
有没有虫子知道的？
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2楼2012-04-14 10:55:12
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xiaomuxiaoma

铁虫 (小有名气)
★
真水无香1709(金币+1): 谢谢参与
好像不能吧
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3楼2012-04-14 13:52:09
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跳跳鱼

木虫 (著名写手)
★
真水无香1709(金币+1): 谢谢参与
没听说过哦
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4楼2012-04-14 16:07:29
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huxx

金虫 (小有名气)
★
真水无香1709(金币+1): 谢谢参与
测序之前即只用一条引物PCR, 不过那不是什么不对称PCR, 只是得到的单链, 而且是 倍数增长, 不是指数.  楼主有什么新想法?
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5楼2012-04-14 21:09:42
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zhaolijunzly

金虫 (小有名气)
★
真水无香1709(金币+1): 谢谢参与
那你的模板得用对称PCR产物啊
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6楼2012-04-16 22:31:19
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chibang1220

木虫 (著名写手)
★
真水无香1709(金币+1): 谢谢参与
没试过啊，你可以试试，也不费事
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8楼2012-04-17 10:03:09
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真水无香1709

铜虫 (小有名气)
谢谢各位虫子！我也没做过这个，只是突然有这个疑问。在百度百科里看到“不对称PCR的关键是控制限制性引物的绝对量，需多次摸索优化两条引物的比例.”这么看来还是需要两条引物的，不过为什么说“不对称PCR的关键是控制限制性引物的绝对量，需多次摸索优化两条引物的比例.”？不太明白这句话的意思
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9楼2012-04-17 15:19:42
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open3377

金虫 (小有名气)
★
真水无香1709(金币+1): 谢谢参与
有意思的问题，  PCR是吧模板放大，即使不对称PCR，你也要把模板放大了看吧，一条引物 吧模板翻一倍能看到么？
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10楼2012-04-17 23:43:39
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真水无香1709

铜虫 (小有名气)
谢谢楼上的回复。那是不是可以理解为，当模板的浓度很低的时候，不对称PCR最初的循环是必须用两个引物的，一定循环次数以后，用非限制性引物扩增单链DNA。既然是这样的话，如果样品中模板浓度本身就比较高的时候，是不是就可以直接用一条引物来扩增单链了呢？
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11楼2012-04-18 09:33:42
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imyting

至尊木虫 (正式写手)
★
真水无香1709(金币+1): 谢谢参与
个人觉得使用的两条引物量不一样，一条是限制性引物，一条是非限制性引物，限制性引物是用于扩大模板数量的，用于产生双链DNA；而非限制性引物才是用于产生SSDNA的，两者的比例是需要摸索的，因为必须要限制性引物消耗完之后才会产生SSDNA,若是限制性引物太多会造成SSDNA的纯度下降，若是限制性引物太少的话，会造成SSDNA的总量或者是浓度下降，楼主需自行摸索！
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12楼2012-04-18 10:57:37
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mrna7楼
2012-04-17 07:04   回复  
真水无香1709(金币+1): 谢谢参与
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