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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 细菌基因组DNA提取 交流
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elbo

金虫 (小有名气)

[交流] 细菌基因组DNA提取 交流

提取的细菌基因组DNA，测定OD260/280=1.8-2.0之间，用0.8%凝胶跑，HIndIII 为marker,结果出来的图中 条带基本全在下面，求正解。
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1楼 2012-04-08 15:43:41
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

棒哈哈

铁虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 欢迎交流 2012-04-10 09:36:23
我是做真菌基因组提取的，以前也遇到过这种情况，浪费了我几个月的时间才找到原因，原因就是你提取的基因组DNA浓度太高，里面含有大量杂质，导致电泳后DNA被杂质带到了底端。解决办法是：一、在沉淀DNA那一步，不要放置太长时间,可以在看到DNA絮状沉淀析出后，用工具将其挑出（我是用的接种针），然后进行洗涤溶解，这样可以减少杂质含量；二、可以直接将前面提取的DNA稀释8-10倍，然后再电泳，就不会是这样的结果了。希望对你能有帮助！
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9楼2012-04-09 16:36:33
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普通回帖

doublehelix

木虫 (著名写手)
★
elbo(金币+1): 谢谢参与
这也太下了吧，不会提成质粒了吧
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2楼2012-04-08 20:30:26
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学术骗子小刚

银虫 (小有名气)
★
elbo(金币+1): 谢谢参与
你用试剂盒提的？
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3楼2012-04-08 22:02:55
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56939733

银虫 (初入文坛)
★
elbo(金币+1): 谢谢参与
下面的应该是RNA的片段

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2012-04-09 00:09:49
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elbo

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 学术骗子小刚 at 2012-04-08 22:02:55:
你用试剂盒提的？

手提，CTAB 冻融法，
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5楼2012-04-09 11:10:37
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elbo

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 56939733 at 2012-04-09 00:09:49:
下面的应该是RNA的片段

如果是RNA的话，基本上基因组DNA就没提出来吗？全提成RNA了
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6楼2012-04-09 11:11:08
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bonbonzd

木虫 (小有名气)
下面的应该是RNA
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7楼2012-04-09 16:00:57
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scienzyme

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
下面的那是RNA，很亮；基因组DNA可以看到，比Marker最大条带跑得慢一些，但不是很亮，质量不是很好。
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8楼2012-04-09 16:11:32
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56939733

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by elbo at 2012-04-09 11:11:08:
如果是RNA的话，基本上基因组DNA就没提出来吗？全提成RNA了

我跑电泳的时候基因组都在最上面，很亮，看你这个基因组也有，但量少，建议先用RNA酶降解里面的RNA
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10楼2012-04-09 21:05:04
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xiadongliang

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
应该是RNA没有清除，不过不影响PCR扩增。
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11楼2012-04-10 08:44:54
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xiadongliang

金虫 (正式写手)
应该是RNA没有清除，不过不影响PCR扩增。
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12楼2012-04-10 08:45:20
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yaoyaozhd

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这很正常，下面的是RNA，上面不太亮的是DNA。如果是要做模板，完全没问题
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13楼2012-04-10 08:56:55
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elbo

金虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by yaoyaozhd at 2012-04-10 08:56:55:
这很正常，下面的是RNA，上面不太亮的是DNA。如果是要做模板，完全没问题

那提出来的片段大小应该在23Kb左右，这个都跑到很下面去了，片段太小了吧，
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14楼2012-04-10 14:40:57
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elbo

金虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by xiadongliang at 2012-04-10 08:45:20:
应该是RNA没有清除，不过不影响PCR扩增。

那提出来的片段大小应该在23Kb左右，这个都跑到很下面去了，片段太小，不是基因组DNA了吧。不知道到底是什么东西
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15楼2012-04-10 14:41:50
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dappxiaomm

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
上面比较暗淡的才是基因组DNA吧？ 下面的应该是RNA片段
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16楼2012-04-11 11:00:19
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xmcxmyes

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我提取过程。老是在苯酚抽提的那一过程出错，分不了层，乳白色上层和下层应该是苯酚
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17楼2012-07-08 10:00:29
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xmcxmyes

新虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by xmcxmyes at 2012-07-08 10:00:29
我提取过程。老是在苯酚抽提的那一过程出错，分不了层，乳白色上层和下层应该是苯酚

我是百思不得其解
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18楼2012-07-08 10:01:04
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Iloveshuai

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
加个RNaseA酶切后，再跑块胶试试
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19楼2012-11-05 09:32:50
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