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陈年芬芳

新虫 (小有名气)

[求助] 同一个平板上挑的两个菌测序，序列差很多，大家帮我看看啊，有比对图！谢谢啦

4-3-1和4-3-2是一个菌斑摇菌后分装的两管样品测序结果
4-2-1和4-2-2是同一个平板上另一个菌斑摇菌后分装的两管测序结果
91和92是引物。
四个样品的峰图都没有问题
为什么4-3这组和4-2这组的序列差这么多啊？都是同一批的啊。
第一次碰到这种情况，以前也只是二三个碱基的差异，这次差太多了，什么原因啊？
我们这个没有人做，也没法和别人比对。肿么办？
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1楼 2012-04-08 13:57:40
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asdf6074053

新虫 (初入文坛)
★ ★
西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-10 18:30:43
不好意思，不知怎么的就乱码了，其实单克隆是没必要分量管单独测序的，除非挑克隆过程就有问题。你是在菌长了多久挑的克隆？
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3楼2012-04-09 12:53:01
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asdf6074053

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这么低的相似性一定是有???阳性的，为什么??是跟目的??列比对呢？而是他们相互比？而且我感觉如果挑克隆时没问题的??是没必??将???克隆分两管?????独测??的，你的是???在平???上长了多久开始挑的？
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2楼2012-04-09 12:42:50
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陈年芬芳

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by asdf6074053 at 2012-04-09 12:53:01:
不好意思，不知怎么的就乱码了，其实单克隆是没必要分量管单独测序的，除非挑克隆过程就有问题。你是在菌长了多久挑的克隆？

大概14个小时吧，测两个也是为了有保障，但是为什么两个菌斑的结果差异这么大啊？
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4楼2012-04-09 13:05:33
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hyacinth326

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流~很活跃啊！ 2012-04-10 18:30:58
差这么多，应该不是一个基因在PCR过程中突变的吧，分析原因可能是模板就不单一吧，然后PCR出来的产物就不单一，连接之后肯定每个克隆都不一样了。。。
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5楼2012-04-09 15:00:40
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