| 查看: 8588 | 回复: 10 | |||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
weandyouzhy木虫 (小有名气)
|
[求助]
PCR的引物扩增后会被降解掉吗？
|
||
一般的DNA复制完成时，RNA引物会被降解掉。那么在pcr扩增反应中。Taq酶会不会将引物链剪切掉呢？另外，能不能详细的介绍下PCR中所加试剂的量的原因。谢谢了 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有161人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助：PCR扩增片段测序结果引物中间多出150bp的片段
已经有5人回复
- 细菌引物 338F 518R 做DGGE之后 pcr
已经有9人回复
- 帮忙评价一下PCR引物
已经有11人回复
- PCR过程中加入的引物的量是不是至少和最后双链产物一样多？
已经有10人回复
- 兼并引物PCR连T载体后，怎么鉴定有没有连上
已经有20人回复
- PCR引物扩增的问题
已经有5人回复
- 如何设计重叠延伸PCR引物
已经有14人回复
- 【求助/交流】求PCR二次扩增引物
已经有11人回复
- 【求助/交流】PCR引物二聚体问题
已经有11人回复
- 【求助/交流】为什么PCR引物不能反复冻融？后果会是怎样
已经有20人回复
- 【求助/交流】pCR引物设计的详细规则
已经有7人回复
- 【求助/交流】PCR引物设计出来了，但酶切之后电泳没条带啊
已经有18人回复
bbwalkman
木虫 (小有名气)
- MolEPI: 6
- 应助: 43 (小学生)
- 金币: 2334.5
- 红花: 3
- 帖子: 240
- 在线: 171.7小时
- 虫号: 1279904
- 注册: 2011-04-28
- 性别: GG
- 专业: 生化分析及生物传感
7楼2012-04-07 20:44:45
zhaohq1209
铁杆木虫 (著名写手)
- MolEPI: 5
- 应助: 41 (小学生)
- 贵宾: 0.034
- 金币: 10666.7
- 散金: 587
- 红花: 12
- 帖子: 2113
- 在线: 333.7小时
- 虫号: 243823
- 注册: 2006-04-15
- 专业: 病原细菌、细菌感染与宿主
2楼2012-04-07 14:40:48
bbwalkman
木虫 (小有名气)
- MolEPI: 6
- 应助: 43 (小学生)
- 金币: 2334.5
- 红花: 3
- 帖子: 240
- 在线: 171.7小时
- 虫号: 1279904
- 注册: 2011-04-28
- 性别: GG
- 专业: 生化分析及生物传感
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+5, MolEPI+1, 鼓励帮助解答问题！ 2012-04-07 19:03:00
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+5, MolEPI+1, 鼓励帮助解答问题！ 2012-04-07 19:03:00
|
应该是不会的，因为在你跑胶的时候会发现在最顶端还是有引物条带存在的，而且Taq酶均具有5'-3'聚合酶活性，但不一定具有3'-5'和5'-3'的外切酶活性。3'-5'外切酶活性可以消除错配，切平末端；5'-3'外切酶活性可以消除合成障碍。 PCR试剂中的量： 1.首先要看你的体系是多少ul，规划好引物、模板、dNTP、酶和Buffer的量，其余用水补齐。 2.引物一般是要过量的，这样才能保证PCR能够在设定的循环里面跑完，一般浓度是uM。 3.模板一般就是ng级别的就可以了，主要是能保证前期引物可以与其结合。 4.dNTP的话一般都是mM级别的，它的浓度要比较大，保证反应顺利进行。 5.酶的话说明书上一般都会提到，按它的活性和单位来加就可以了。 6.Buffer要根据你的总体积，将储备浓度换算成最终的1X的就可以了。 祝好运！ |
3楼2012-04-07 14:56:00
imyting
至尊木虫 (正式写手)
- MolEPI: 6
- 应助: 66 (初中生)
- 金币: 10218.2
- 散金: 658
- 红花: 5
- 帖子: 805
- 在线: 167.6小时
- 虫号: 736362
- 注册: 2009-03-31
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+5, 鼓励帮助解答问题！ 2012-04-07 19:03:09
weandyouzhy: 回帖置顶 2012-04-07 20:23:00
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+5, 鼓励帮助解答问题！ 2012-04-07 19:03:09
weandyouzhy: 回帖置顶 2012-04-07 20:23:00
| 答案是否定的，Taq酶不具有水解引物的能力，不然的话PCR还如何继续，或者是你如何控制Taq酶发挥作用？PCR条件中有考虑这方面的吗？此外，在拿PCR产物跑胶时，有时能看到明显的引物二聚体条带，这也说明引物不会被降解。PCR体系中各组分的量基本是围绕酶和模板确定的，Buffer是10×的，当然加总体积的十分之一了，Mg离子的浓度关系到Taq酶的活力也是确定的，引物的浓度只要达到一定程度就好了，过多会产生二聚体之类的，过少影响PCR反应启动，模板也是的，多了也不好纯化啊，酶的话一般都有推荐量的，一定的体积加上那么多的酶就能满足要求了。而且酶的说明书也没有明确说其活力如何，只是给出在一定条件下的PCR结果罢了，只是参考。 |
4楼2012-04-07 15:04:58
