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bbwalkman

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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amisking: 金币+5, MolEPI+1, 鼓励帮助解答问题! 2012-04-07 19:03:00
应该是不会的,因为在你跑胶的时候会发现在最顶端还是有引物条带存在的,而且Taq酶均具有5'-3'聚合酶活性,但不一定具有3'-5'和5'-3'的外切酶活性。3'-5'外切酶活性可以消除错配,切平末端;5'-3'外切酶活性可以消除合成障碍。
PCR试剂中的量:
1.首先要看你的体系是多少ul,规划好引物、模板、dNTP、酶和Buffer的量,其余用水补齐。
2.引物一般是要过量的,这样才能保证PCR能够在设定的循环里面跑完,一般浓度是uM。
3.模板一般就是ng级别的就可以了,主要是能保证前期引物可以与其结合。
4.dNTP的话一般都是mM级别的,它的浓度要比较大,保证反应顺利进行。
5.酶的话说明书上一般都会提到,按它的活性和单位来加就可以了。
6.Buffer要根据你的总体积,将储备浓度换算成最终的1X的就可以了。
祝好运!
3楼2012-04-07 14:56:00
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