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yangzhengnan

新虫 (初入文坛)

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[求助] 荧光pcr标准曲线问题

今天做了一条标准曲线，很奇怪，目的基因模板按2倍稀释，但是ct值却相差很小，复孔之间的差别很大，但内参复孔间的差别很小，不知各位大侠可不可以给点建议呢？到底是哪里出了问题？

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1楼 2012-04-05 17:33:51

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小慈abc

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8楼: Originally posted by beautybanana at 2012-06-24 12:35:41
我做了一年多的荧光定量PCR，所以能够给你些建议：1 稀释，你大概是用灭菌的去离子水稀释的吧，一般的用水稀释，DNA并不能很好的均匀分散在水里，尤其是多次梯度稀释，模版稀释10倍，Ct值大约相差3.3，稀释2倍，那么 ...

你好打扰你了看了你的回复想问个问题好嘛？？

做标曲一般适合的浓度梯度是多少呢为什么我10的6次方拷贝数的ct值很小浓度太高不能用呢？我看好多都是用2-7次方的呀？谢谢您啦！！！

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12楼2014-06-26 20:04:58

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小慈abc

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引用回帖:

你好打扰你了看了你的回复想问个问题好嘛？？

做标曲一般适合的浓度梯度是多少呢为什么我10的6次方拷贝数的ct值很小浓度太高不能用呢？我看好多都是用2-7次方的呀？谢谢您啦！！！

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13楼2014-06-26 20:05:17

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小慈abc

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14楼: Originally posted by beautybanana at 2014-06-26 21:16:23
浓度不能太高, 否则扩增的曲线会有些异常, PCR体系中最高的浓度你可以用0.5 ng/ul, 后面0.05ng/ul, 10倍稀释的...你先试试, 有问题再继续问我好了....

我最高浓度用的是0.072ng/ul 曲线就已经成弧形了，10倍稀释后两个梯度也不能用请问这是为什么呢？