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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 今天又提了一次rna，效果还是不理想，有点小崩溃。。。
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weining1203

新虫 (小有名气)

[求助] 今天又提了一次rna，效果还是不理想，有点小崩溃。。。

今天提出的rna，好像有一点弱弱的28s带，很弱很弱的那种，不知道是不是，要是有降解的话是不是得拖尾啊？用的takala的盒子，提取的材料材料为针叶类植物的幼嫩组织，难道是我操作有问题还是盒子不行啊？？？不行我就自己配试剂，或者大侠们给推荐个盒子。marker为DL2000,如下图：可以看出有基因组dna污染和蛋白污染，请高手分析一下。。。先谢过了
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1楼 2012-04-03 13:13:32
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
★
西瓜: 金币+1, 过节不出去玩啊 2012-04-03 15:14:47
哦...............
还是上次那个建议，一定要测分光光度值，用Nanodrop或其他的，先确定纯度才能看完整度，你纯度都不达标，再完整的RNA都不能进行下游应用的。所以你现在只有电泳图，实在不能说明哪方面出了问题
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Let God do with it as He wills
2楼2012-04-03 13:33:06
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weining1203

新虫 (小有名气)
amisking: 回帖置顶 2012-04-03 21:00:10
引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-04-03 13:33:06:
哦...............
还是上次那个建议，一定要测分光光度值，用Nanodrop或其他的，先确定纯度才能看完整度，你纯度都不达标，再完整的RNA都不能进行下游应用的。所以你现在只有电泳图，实在不能说明哪方面出了问题 ...

呵呵 是啊 准备测一下 啊 谢谢！
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3楼2012-04-03 14:09:37
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weining1203

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-04-03 13:33:06:
哦...............
还是上次那个建议，一定要测分光光度值，用Nanodrop或其他的，先确定纯度才能看完整度，你纯度都不达标，再完整的RNA都不能进行下游应用的。所以你现在只有电泳图，实在不能说明哪方面出了问题 ...

还想问一下，用分光光度计怎么测啊。。。能说详细一点吗，比如样品稀释多少倍等，谢谢。。。
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4楼2012-04-03 14:11:00
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wtyyyyy1988

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, Good! 2012-04-03 15:15:01
用PH=7.5的TRIS-HCL稀释样品，一般稀释五十倍，在测紫外，tris-hcl记得要用DEPC水配还要高压
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我就是我
5楼2012-04-03 14:48:18
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weining1203

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wtyyyyy1988 at 2012-04-03 14:48:18:
用PH=7.5的TRIS-HCL稀释样品，一般稀释五十倍，在测紫外，tris-hcl记得要用DEPC水配还要高压

谢谢
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6楼2012-04-03 16:13:46
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zgb1982

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wtyyyyy1988 at 2012-04-03 14:48:18:
用PH=7.5的TRIS-HCL稀释样品，一般稀释五十倍，在测紫外，tris-hcl记得要用DEPC水配还要高压

直接用DEPC水溶解的RNA怎么测呢？为什么要用TRIS－HCL呢
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7楼2012-04-03 19:47:05
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wtyyyyy1988

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by zgb1982 at 2012-04-03 19:47:05:
直接用DEPC水溶解的RNA怎么测呢？为什么要用TRIS－HCL呢

一般直接用DEPC水溶解的RNA测紫外的话，数值会偏小，用TRIS-HCL缓冲液的话，数值会相对较准一些，一般都是跑电泳看RNA质量如何是否有降解，再结合测紫外决定浓度
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我就是我
8楼2012-04-03 20:01:56
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decloud

木虫 (著名写手)
因为不用RNAse 酶free的水阿,,,
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适则存乙，劳则忙乙，
9楼2012-04-04 00:14:22
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weining1203

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by decloud at 2012-04-04 00:14:22:
因为不用RNAse 酶free的水阿,,,

是吗？？？这样可以吗？？？
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10楼2012-04-04 09:33:25
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