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weining1203

新虫 (小有名气)

[求助] 今天又提了一次rna,效果还是不理想,有点小崩溃。。。

今天提出的rna,好像有一点弱弱的28s带,很弱很弱的那种,不知道是不是,要是有降解的话是不是得拖尾啊?用的takala的盒子,提取的材料材料为针叶类植物的幼嫩组织,难道是我操作有问题还是盒子不行啊???不行我就自己配试剂,或者大侠们给推荐个盒子。marker为DL2000,如下图:可以看出有基因组dna污染和蛋白污染,请高手分析一下。。。先谢过了



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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气


西瓜: 金币+1, 过节不出去玩啊 2012-04-03 15:14:47
哦...............
还是上次那个建议,一定要测分光光度值,用Nanodrop或其他的,先确定纯度才能看完整度,你纯度都不达标,再完整的RNA都不能进行下游应用的。所以你现在只有电泳图,实在不能说明哪方面出了问题
Let God do with it as He wills
2楼2012-04-03 13:33:06
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weining1203

新虫 (小有名气)

amisking: 回帖置顶 2012-04-03 21:00:10
引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-04-03 13:33:06:
哦...............
还是上次那个建议,一定要测分光光度值,用Nanodrop或其他的,先确定纯度才能看完整度,你纯度都不达标,再完整的RNA都不能进行下游应用的。所以你现在只有电泳图,实在不能说明哪方面出了问题 ...

呵呵 是啊 准备测一下 啊 谢谢!
3楼2012-04-03 14:09:37
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weining1203

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-04-03 13:33:06:
哦...............
还是上次那个建议,一定要测分光光度值,用Nanodrop或其他的,先确定纯度才能看完整度,你纯度都不达标,再完整的RNA都不能进行下游应用的。所以你现在只有电泳图,实在不能说明哪方面出了问题 ...

还想问一下,用分光光度计怎么测啊。。。能说详细一点吗,比如样品稀释多少倍等,谢谢。。。
4楼2012-04-03 14:11:00
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wtyyyyy1988

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+2, Good! 2012-04-03 15:15:01
用PH=7.5的TRIS-HCL稀释样品,一般稀释五十倍,在测紫外,tris-hcl记得要用DEPC水配还要高压
我就是我
5楼2012-04-03 14:48:18
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weining1203

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by wtyyyyy1988 at 2012-04-03 14:48:18:
用PH=7.5的TRIS-HCL稀释样品,一般稀释五十倍,在测紫外,tris-hcl记得要用DEPC水配还要高压

谢谢
6楼2012-04-03 16:13:46
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zgb1982

木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by wtyyyyy1988 at 2012-04-03 14:48:18:
用PH=7.5的TRIS-HCL稀释样品,一般稀释五十倍,在测紫外,tris-hcl记得要用DEPC水配还要高压

直接用DEPC水溶解的RNA怎么测呢?为什么要用TRIS-HCL呢
7楼2012-04-03 19:47:05
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wtyyyyy1988

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by zgb1982 at 2012-04-03 19:47:05:
直接用DEPC水溶解的RNA怎么测呢?为什么要用TRIS-HCL呢

一般直接用DEPC水溶解的RNA测紫外的话,数值会偏小,用TRIS-HCL缓冲液的话,数值会相对较准一些,一般都是跑电泳看RNA质量如何是否有降解,再结合测紫外决定浓度
我就是我
8楼2012-04-03 20:01:56
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decloud

木虫 (著名写手)

因为不用RNAse 酶free的水阿,,,
适则存乙,劳则忙乙,
9楼2012-04-04 00:14:22
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weining1203

新虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by decloud at 2012-04-04 00:14:22:
因为不用RNAse 酶free的水阿,,,

是吗???这样可以吗???
10楼2012-04-04 09:33:25
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