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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 16S rRNA文库 引物的选择
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见神一笑

木虫 (著名写手)

[求助] 16S rRNA文库 引物的选择已有1人参与

我最近要建一个16S rRNA文库，因为是第一次做，没有什么经验，想请教下各位通用引物的选择有什么要求吗？
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好好努力
1楼2012-04-01 22:46:41
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ybfang

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我鉴定菌种用的是1492R和27F或8F
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共勉！！！！
2楼2012-04-02 15:18:35
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yaomengche

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
上网查一下，有的文献上面肯定会有的，引物是通用的
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

见神一笑
3楼2012-04-04 10:32:43
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见神一笑

木虫 (著名写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by yaomengche at 2012-04-04 10:32:43:
上网查一下，有的文献上面肯定会有的，引物是通用的

引物上需要加酶切位点吗？
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好好努力
4楼2012-04-04 18:39:21
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yaomengche

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你只是做一个菌种鉴定，pcr完了，纯化或者直接给公司测序就行了，加酶切位点干嘛，一般是不需要的
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5楼2012-04-05 23:30:55
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freerain

禁虫 (职业作家)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
6楼2012-04-06 02:04:46
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见神一笑

木虫 (著名写手)
你们都误会我的意思了。我这次说详细一点。我有一个土壤样品，想考查其中的微生物物种多样性。我先是从样品提取了元基因组DNA，然后将以细菌和古菌通用引物扩增元基因组中细菌和古菌的16S rDNA,接下来应当是将扩增产物纯化后连T载体，转化到大肠杆菌中后挑取足够的阳性克隆培养，最后抽提质粒做酶切图谱，根据酶切图谱来分析物种多样性。我的问题是不知道引物中要不要引入内切酶的酶切位点？
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好好努力
7楼2012-04-06 08:29:47
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zhongzhen

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
见神一笑: 金币+20, ★★★★★最佳答案 2014-12-29 09:10:26
引用回帖:
7楼: Originally posted by 见神一笑 at 2012-04-06 08:29:47
你们都误会我的意思了。我这次说详细一点。我有一个土壤样品，想考查其中的微生物物种多样性。我先是从样品提取了元基因组DNA，然后将以细菌和古菌通用引物扩增元基因组中细菌和古菌的16S rDNA,接下来应当是将扩增产 ...

不用啊，酶切图谱主要看你的目的片段的多样性的
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8楼2014-12-26 22:42:28
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