24小时热门版块排行榜

返回列表

805085868

铁虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 75.4
帖子: 92
在线: 26.5小时
虫号: 1393000

[交流] 求基因敲除高手。。。。

我基因敲除用的方法是同源重组，设计的上游同源臂测序之后发现有个别位点突变，请问影响基因敲除实验吗？会不会影响上游基因的表达？（上游基因的ORF与下游基因的ORF方向相同。）

回复此楼

» 猜你喜欢

SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂已经有0人回复
氢氧化钾活化操作已经有18人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有120人回复
散金已经有68人回复
生物质超级电容器已经有0人回复
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析已经有0人回复
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点已经有0人回复
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点已经有0人回复
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？已经有0人回复
His标签蛋白纯化怎么才能快？已经有0人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴

1楼 2012-03-31 21:25:40

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

lincy2010

银虫 (小有名气)

MolEPI: 3
应助: 11 (小学生)
金币: 530.4
帖子: 72
在线: 54.6小时
虫号: 1066511

★ ★ ★ ★
805085868(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+3, 回复很耐心啊~愚人节快乐O(∩_∩)O 2012-04-01 17:43:00

首先想问你测序的方式是什么？PCR产物直接测还是连到载体上再测？测的是双向还是单向？因为这些会影响测序结果的可信度。
其次，“个别位点突变”指的是只突变一个吗？如果同源臂较长，估计是不影响重组实验，但突变的位点会不会在重组体中那就不一定了，有机率在，也有机率不在。可以PCR包含上游同源臂的片断测序验证。
再次，如果筛选到的都有这个突变位点，会不会影响基因表达，要看突变的处于哪个位置。若在翻译区，会不会造成移码突变，若只是换了碱基，看蛋白序列改变了没；若在非翻译区，还在看是否改了启动子RBS等等，大概就是这样吧，说的不对的，请大家指正哈~
愚人节快乐，不得不说小木虫太有才啦^-^