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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 重组的载体转到菌里再提质粒就变成这样了，也不知道能用不
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luba

新虫 (小有名气)

[求助] 重组的载体转到菌里再提质粒就变成这样了，也不知道能用不

载体是pCDNA3（5400bp)，插入了一个830多的基因，加起来应该6200bp左右，转到JM109里，再提质粒，上方有很亮很粗一条带，不知道是什么。
一共三组，第一组（从左向右）是用的pET21b(5443bp)做的载体，同样的插入基因。后两组都是pCDNA3。Maker用的是lamda HindIII,第一至三条带分别为23130bp,9416bp,4361bp。所以我觉得我的重组质粒大小也不太对，跑的稍微往上了点。但是测序结果是对的。当时挑的单克隆也PCR鉴定过，也是有插入基因条带的。不知道这亮带到底是什么，为什么用pET载体就没有。很担心会影响后续试验，哪位大侠帮我分析分析。
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1楼 2012-03-22 22:56:22
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whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
质粒条带上方的不规则条带可能是提质粒过程中混入的基因组DNA或者蛋白质之类的杂质
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4楼2012-03-23 09:46:42
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
luba: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2012-03-24 15:07:10
提取质粒后直接跑电泳并不能根据在琼脂糖凝胶上的位置判断质粒的大小，这是因为质粒有多重构型，而且又是环状，你的marker是线性marker。所以，最好的方法是提取的质量进行单酶切或双酶切，然后再跑电泳。

以图上来看，你的JM109是有质粒的，一般就不会错。
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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
2楼2012-03-23 07:00:53
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yanhua_2006

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助，很热心哦 2012-03-23 14:35:04
质粒直接电泳跑出来的条带大小无法准确判断，如楼上所说，最好进行一下酶切然后再电泳。不过还有一点，即使是那样，可能电泳液不一定能准确表明条带的大小。一般EB染色误差会小很多，如果你采用Sybr Green之类的染色剂染色，可能误差会更大一些。至于你这次的电泳图，我觉得可能跟你提取过程中的操作有关，或者跟你所用的宿主菌有关，有可能有杂志的影响。个人意见，仅供参考。
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3楼2012-03-23 08:30:40
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