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luba

新虫 (小有名气)

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[求助] 重组的载体转到菌里再提质粒就变成这样了，也不知道能用不

载体是pCDNA3（5400bp)，插入了一个830多的基因，加起来应该6200bp左右，转到JM109里，再提质粒，上方有很亮很粗一条带，不知道是什么。
一共三组，第一组（从左向右）是用的pET21b(5443bp)做的载体，同样的插入基因。后两组都是pCDNA3。Maker用的是lamda HindIII,第一至三条带分别为23130bp,9416bp,4361bp。所以我觉得我的重组质粒大小也不太对，跑的稍微往上了点。但是测序结果是对的。当时挑的单克隆也PCR鉴定过，也是有插入基因条带的。不知道这亮带到底是什么，为什么用pET载体就没有。很担心会影响后续试验，哪位大侠帮我分析分析。

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1楼2012-03-22 22:56:22

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yanhua_2006

铁杆木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助，很热心哦 2012-03-23 14:35:04

质粒直接电泳跑出来的条带大小无法准确判断，如楼上所说，最好进行一下酶切然后再电泳。不过还有一点，即使是那样，可能电泳液不一定能准确表明条带的大小。一般EB染色误差会小很多，如果你采用Sybr Green之类的染色剂染色，可能误差会更大一些。至于你这次的电泳图，我觉得可能跟你提取过程中的操作有关，或者跟你所用的宿主菌有关，有可能有杂志的影响。个人意见，仅供参考。