24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1309  |  回复: 3

luba

新虫 (小有名气)

[求助] 重组的载体转到菌里再提质粒就变成这样了,也不知道能用不

载体是pCDNA3(5400bp),插入了一个830多的基因,加起来应该6200bp左右,转到JM109里,再提质粒,上方有很亮很粗一条带,不知道是什么。
一共三组,第一组(从左向右)是用的pET21b(5443bp)做的载体,同样的插入基因。后两组都是pCDNA3。Maker用的是lamda HindIII,第一至三条带分别为23130bp,9416bp,4361bp。所以我觉得我的重组质粒大小也不太对,跑的稍微往上了点。但是测序结果是对的。当时挑的单克隆也PCR鉴定过,也是有插入基因条带的。不知道这亮带到底是什么,为什么用pET载体就没有。很担心会影响后续试验,哪位大侠帮我分析分析。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
luba: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2012-03-24 15:07:10
提取质粒后直接跑电泳并不能根据在琼脂糖凝胶上的位置判断质粒的大小,这是因为质粒有多重构型,而且又是环状,你的marker是线性marker。所以,最好的方法是提取的质量进行单酶切或双酶切,然后再跑电泳。

以图上来看,你的JM109是有质粒的,一般就不会错。
我有一个梦想,我梦想有一天,我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力,居住在自己愿意居住的地方。
2楼2012-03-23 07:00:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yanhua_2006

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助,很热心哦 2012-03-23 14:35:04
质粒直接电泳跑出来的条带大小无法准确判断,如楼上所说,最好进行一下酶切然后再电泳。不过还有一点,即使是那样,可能电泳液不一定能准确表明条带的大小。一般EB染色误差会小很多,如果你采用Sybr Green之类的染色剂染色,可能误差会更大一些。至于你这次的电泳图,我觉得可能跟你提取过程中的操作有关,或者跟你所用的宿主菌有关,有可能有杂志的影响。个人意见,仅供参考。
3楼2012-03-23 08:30:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
质粒条带上方的不规则条带可能是提质粒过程中混入的基因组DNA或者蛋白质之类的杂质
4楼2012-03-23 09:46:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 luba 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化工求调剂! +17 RichLi_ 2026-04-06 17/850 2026-04-06 22:26 by qlm5820
[考研] 土木水利专硕276分求调剂 +3 我想上学!!6 2026-04-05 6/300 2026-04-06 18:51 by 我想上学!!6
[考研] 070300化学学硕311分求调剂 +11 梁富贵险中求 2026-04-04 13/650 2026-04-06 07:24 by houyaoxu
[考研] 考研生物学考A区211,初试322,科目生化和生物综合,求调剂 +6 。。。54 2026-04-03 6/300 2026-04-05 14:54 by JOKER0401
[考研] 288求调剂,一志愿华南理工大学071005 +6 ioodiiij 2026-04-04 6/300 2026-04-05 10:09 by guoweigw
[考研] 材料与化工306分找调剂 +12 沧海轻舟e 2026-04-03 13/650 2026-04-04 23:45 by lqwchd
[考研] 考研调剂 +5 四川王涛 2026-04-04 5/250 2026-04-04 22:18 by 啵啵啵0119
[考研] 297求调剂 +11 ljy20040718! 2026-04-03 13/650 2026-04-04 09:23 by 来看流星雨10
[考研] 283分材料与化工求调剂 +29 罗KAKA 2026-04-02 29/1450 2026-04-03 23:56 by userper
[考研] 322求调剂 +6 FZAC123 2026-04-03 6/300 2026-04-03 22:23 by 科研小专家
[硕博家园] 求老师收留 +9 lllq123 2026-04-03 9/450 2026-04-03 13:48 by 呼吸都是减肥
[考研] 321求调剂 +17 y-yh 2026-04-01 20/1000 2026-04-03 12:57 by y-yh
[考研] 309求调剂 +14 呆菇不是戴夫 2026-04-02 14/700 2026-04-03 09:42 by 蓝云思雨
[考研] 279求调剂 +5 傅文秋 2026-04-02 5/250 2026-04-02 18:10 by 笔落锦州
[考研] 求调剂 302分初试 0854 +5 伶可乐 2026-04-02 5/250 2026-04-02 17:53 by 笔落锦州
[考研] 26考研调剂 +4 Wnz.20030617 2026-04-01 5/250 2026-04-02 16:11 by 1939136013狗壮
[考研] 348求调剂 +6 吴彦祖24k 2026-04-02 6/300 2026-04-02 14:07 by 给你你注意休息
[考研] 324求调剂 +5 想上学求调 2026-04-01 6/300 2026-04-02 10:16 by sanrepian
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-04-02 4/200 2026-04-02 09:52 by yulian1987
[考研] 080500-315分复试调剂 +9 上岸3821 2026-03-31 9/450 2026-03-31 17:29 by 唐沐儿
信息提示
请填处理意见