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liulianwei

铁虫 (初入文坛)

[求助] 酶切片段大小不稳定

大家好,我在做微卫星标记的开发,用Sau 3AI内切酶酶切基因组DNA,回收250-1000bp的片段,寡核苷酸链 A( 5'- GATCGTCGACGGTACCGAATTCT- 3') 和 寡 核 苷 酸 链 B ( 5'- GTCAAGAATTCGGTACCGTCGAC- 3') 合 成 Brown 接头。在连接酶作用下连接接头,16°过夜,用寡 核 苷 酸 链 B 作为引物 PCR预扩增时,电泳检测片段范围为250-2000(2000多的也有),重复了好几次,都是这样,而且二次PCR电泳也是这种情况,不知道是什么原因,请大家多指教,谢谢!图片见附件!

基因组酶切



一次PCR电泳



二次PCR电泳
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ZOEY21

金虫 (小有名气)

想问楼主解决了没有 同遭遇这个问题的求解
5楼2012-06-26 15:15:39
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王雨云

金虫 (小有名气)

每整过微卫星,但是看你的Marker还跑得蛮清楚的嘛
3楼2012-03-21 17:28:14
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xuchenxi121

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
liulianwei: 金币+5, 有帮助 2012-04-05 17:20:44
可能是多轮PCR产生的特殊结构,可以尝试适当减少扩增的循环数
4楼2012-03-30 18:05:25
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