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酶切片段大小不稳定
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大家好，我在做微卫星标记的开发，用Sau 3AI内切酶酶切基因组DNA，回收250-1000bp的片段，寡核苷酸链 A( 5'- GATCGTCGACGGTACCGAATTCT- 3') 和 寡 核 苷 酸 链 B ( 5'- GTCAAGAATTCGGTACCGTCGAC- 3') 合 成 Brown 接头。在连接酶作用下连接接头，16°过夜，用寡 核 苷 酸 链 B 作为引物 PCR预扩增时，电泳检测片段范围为250-2000（2000多的也有），重复了好几次，都是这样，而且二次PCR电泳也是这种情况，不知道是什么原因，请大家多指教，谢谢！图片见附件！ 基因组酶切  一次PCR电泳  二次PCR电泳 |
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