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简0516单

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 关于毕赤酵母表达

各位老师,请教一下,在做毕赤酵母表达时,转到比赤酵母里之后,做PCR鉴定时,能不能直接做菌落PCR?酵母菌的壁又特别厚,该怎么处理呢?
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墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
简0516单: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 谢谢帮助 2012-04-07 00:09:56
100°水浴5-10min 再立即放入-80冰箱 反复三次后  再用溶菌酶(最好用lyticase)处理  可以菌落PCR 不用酶处理也可能P出来

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仕不可不弘毅,任重而道远
2楼2012-03-20 08:51:03
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墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫

引用回帖:
5楼: Originally posted by 简0516单 at 2012-03-20 11:14:02:
非常感谢您的帮助,请问在-80要放多长时间呢?溶菌酶的亮要用多少呢?

-80 5-10min  你挑的是单菌落 所以溶菌酶只要加一点点 (1ul)
仕不可不弘毅,任重而道远
8楼2012-03-20 12:41:41
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墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫

引用回帖:
10楼: Originally posted by 简0516单 at 2012-03-20 12:49:24:
在--20可不可以呢?最近--80出了点问题

应该也差不多 试试
仕不可不弘毅,任重而道远
14楼2012-03-20 16:58:58
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墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫

【答案】应助回帖

引用回帖:
15楼: Originally posted by 简0516单 at 2012-03-20 17:02:17:
单菌落应该溶在多少微升的水里呢?

酵母菌落相对大肠比较大 50-100ul都没问题
仕不可不弘毅,任重而道远
16楼2012-03-21 08:58:27
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墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
简0516单: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 谢谢帮助 2012-04-15 17:21:53
引用回帖:
15楼: Originally posted by 简0516单 at 2012-03-20 17:02:17:
单菌落应该溶在多少微升的水里呢?

加水多少之类都是次要的 你实践下就明白了 不要纠结在这些小问题里面 行动吧
仕不可不弘毅,任重而道远
17楼2012-03-21 08:59:33
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