| 查看: 3508 | 回复: 15 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
2010203011银虫 (小有名气)
|
[求助]
救命啊！荧光定量PCR 扩增问题
|
|
|
质粒扩增和样品扩增曲线不一样。 1，湖水总细菌DNA提取，Omega biotek的水体DNA提取试剂盒 2，引物为文献中的经典引物，退火温度在梯度PCR仪上找的较为适合的温度。 3，荧光定量PCR仪为ROTOR Gene-6000，试剂盒为QIAGEN。 4，质粒是用样品DNA的PCR产物，回收后重组后提取，按10倍稀释成标准品。 结果，每次做的试验结果，样品的扩增曲线总是很奇怪，不光滑。和质粒就很不一样。我已经排除了以下几个原因： 1. 扩增体系，QIAGEN 和Takara的试剂盒都试过，一样的 问题 2.仪器问题，用过ABI7500比较过，一样的 问题。 3. 引物，都是文献中比较常用的引物，noszF/1622-R等。 4.模板，借用了别人用mobio提取的土壤DNA，也有问题，是不是可以排除不是试剂盒的问题？ 5.耗材，ABI和Axygen的用，也没有解决问题。 求救，博士二年级了，文章还在等数据，急死人了，不知道有没有碰到这样情况的，请教啊~   |
回复此楼» 猜你喜欢
A期刊撤稿
已经有3人回复
-
职称评审没过，求安慰
已经有34人回复
-
垃圾破二本职称评审标准
已经有17人回复
-
回收溶剂求助
已经有6人回复
-
投稿Elsevier的Neoplasia杂志，到最后选publishing options时页面空白，不能完成投稿
已经有22人回复
-
申请26博士
已经有5人回复
-
EST投稿状态问题
已经有7人回复
-
毕业后当辅导员了，天天各种学生超烦
已经有4人回复
-
求助文献
已经有3人回复
-
投稿返修后收到这样的回复，还有希望吗
已经有8人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 荧光定量PCR扩增效率怎么做？？？？我要被逼疯了
已经有17人回复
- 关于SYBR半定量荧光定量PCR的问题求助
已经有2人回复
- 【求助/交流】求助关于荧光定量PCR染料问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】荧光定量pcr出现直线扩增曲线，求指导
已经有5人回复
- 【求助/交流】求助，关于荧光定量PCR问题
已经有5人回复
- 【分享】荧光定量PCR简介
已经有13人回复
- 【求助/交流】荧光PCR扩增曲线问题
已经有18人回复
- 【求助/交流】关于荧光定量PCR的小问题,请高手指点 【问题已解决】
已经有7人回复
- 【求助/交流】关于做荧光定量pcr的模板问题
已经有12人回复
- 【求助/交流】关于荧光定量PCR中cdna合成的问题
已经有12人回复
- 【求助/交流】相对荧光定量pcr检测基因表达差异问题
已经有8人回复
- 【求助/交流】荧光定量pcr
已经有11人回复
2010203011
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 319.6
- 散金: 114
- 红花: 1
- 帖子: 185
- 在线: 82.6小时
- 虫号: 1067918
- 注册: 2010-08-02
- 专业: 环境微生物学
送鲜花一朵 
8楼2012-03-14 16:55:19
3楼2012-03-14 00:22:27
【答案】应助回帖
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
2010203011: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-04-22 09:47:21
感谢参与，应助指数 +1
2010203011: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-04-22 09:47:21
| 换一种菌的DNA为模板试一下，有可能是从土壤中提取基因组含有杂质影响qPCR的体系吧。排除样本质量的影响 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
4楼2012-03-14 09:10:49
yz_fish
木虫 (正式写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 4066.7
- 红花: 2
- 帖子: 392
- 在线: 286小时
- 虫号: 906661
- 注册: 2009-11-18
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
【答案】应助回帖
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
2010203011: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-04-22 09:46:53
感谢参与，应助指数 +1
2010203011: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-04-22 09:46:53
把湖水提取出来的模板DNA稀释十倍，一百倍或者一千倍后试试，保证楼主能得到心仪的扩增曲线 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
5楼2012-03-14 10:03:03