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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 要做蛋白纯化了，求高手指教注意细节
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zhiqiang5070

木虫 (正式写手)

[求助] 要做蛋白纯化了，求高手指教注意细节


PS：包涵体里面杂蛋白比较多怎么去

十分期待自己的实验能够顺利


希望能得到前辈帮助
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无善无恶心之体
1楼 2012-03-09 15:45:43
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zhiqiang5070

木虫 (正式写手)

忘了说了，我用的是组氨酸标签过柱子纯化
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无善无恶心之体
2楼2012-03-09 15:47:16
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果断悉尼

铁杆木虫 (知名作家)

三沙市名誉常务副市长

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
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amisking(金币+1): 鼓励发帖交流！ 2012-03-09 19:48:11
zhiqiang5070: 金币+1, ★有帮助 2012-03-30 11:28:27
多摸摸条件呗
咪唑洗脱 先试试梯度洗脱吧
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我的微信号happyjk5208，谢绝闲聊
3楼2012-03-09 15:48:33
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whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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amisking(金币+2): 鼓励发帖交流！ 2012-03-09 19:48:07
zhiqiang5070: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢 2012-03-30 11:27:13
His-tag和镍柱是比较常用的蛋白纯化方法，主要是看你蛋白的可溶性表达量了，如果目标蛋白的可溶性好，纯化非常容易，但要是都在包涵体中表达了，就很麻烦，涉及到变性复性。纯化过程其实没有什么容易出错的步骤。祝好运！
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4楼2012-03-09 16:12:34
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karin

木虫 (小有名气)
我也要做组氨酸标签纯化了，也是包涵体蛋白。祝我们好运！
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坚持就是胜利
5楼2012-03-09 17:10:43
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Apeterson

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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zhiqiang5070: 金币+2, ★有帮助 2012-03-30 11:27:38
还是要进行梯度洗脱，而且，一定要注意柱子内的PH环境。。反正，你多洗脱柱子缓冲液跟上就差不多的。。
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考研奋斗中····
6楼2012-03-11 10:01:17
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ruixingrui

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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西瓜(金币+3): Good！ 2012-03-11 16:38:13
zhiqiang5070: 金币+1, ★有帮助 2012-03-30 11:28:14
建议先用盐酸胍梯度溶解，再用加1%去垢剂的去离子水清洗，变性复性反复几次，然后做亲和层析。
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7楼2012-03-11 13:06:00
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fishbirdchu

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
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zhiqiang5070: 金币+1, ★有帮助 2012-03-30 11:28:02
如果目的蛋白在包涵体中，可以选择进行胶回收，用蛋白浸提液浸提蛋白，之后用丙酮沉淀。这样就可以纯化出所需要的蛋白。这种情况用咪唑梯度洗脱效果并不佳。
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8楼2012-03-12 23:09:11
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龙翔在天

木虫 (小有名气)
包涵体多洗几次，然后用高浓度的变性剂熔解，过柱就可以了！
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欲谋发展大计，必察天下大势—————一切皆有可能
9楼2012-06-29 15:43:50
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