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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于脱盐柱的问题
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chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amq7392(金币+2): ★★★很有帮助 谢谢 2012-03-08 09:57:04
不管样品多少，你可以分次上样，多次desalting
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11楼2012-03-06 09:21:09
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有紫外吸收，分子量小于5000的东西很多啊
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12楼2012-03-07 14:52:41
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amq7392

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2012-03-05 22:37:24:
这个问题似乎我在哪个帖子里回答过了

谢谢，那么我搜搜你的帖子
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13楼2012-03-08 09:56:13
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
我自己都找不到了，就在这里说吧，
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
14楼2012-03-09 03:05:13
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

看天(BioEPI+1): 感谢热心交流 2012-03-09 16:21:24
引用回帖:
14楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2012-03-09 03:05:13:
我自己都找不到了，就在这里说吧，

注意下面图片左上角的注释，cond=电导，cond%=电导率，这两个是表示盐的，A280是用于测定蛋白质的。每两条竖直的红线是每一次脱盐洗脱的循环，那一次我一共做了很多次，用的是AKTA纯化仪，层析柱是GE的desalting，26/10，流速快10ml/min。

我用的样品是真菌固体培养物用超纯水浸泡，离心得到的粗酶液脱盐。从A280曲线来看，盐峰之后再次升高，说明粗酶液里也有很多分子量比蛋白质小的能引起A280吸收的物质。由于A280的原理是测定分子结构中有共轭双键构成大Ω键的物质，所以某些存在此结构的色素也能引起光吸收，而这部分洗脱液确实是有颜色的，所以可能是分子量较小的色素和其它非蛋白质的小分子物质，而不是蛋白质。因为脱盐柱是分子筛，分子尺寸大的蛋白质应该在盐之前就被洗脱出来，存在于第一个峰中。(怎么说我的图是广告呢，再发一次又能发上来的怎么可能是嘛)
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15楼2012-03-09 03:14:19
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amq7392

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2012-03-09 03:14:19:
注意下面图片左上角的注释，cond=电导，cond%=电导率，这两个是表示盐的，A280是用于测定蛋白质的。每两条竖直的红线是每一次脱盐洗脱的循环，那一次我一共做了很多次，用的是AKTA纯化仪，层析柱是GE的desalting ...

谢谢，我明白了，看你的图的情况跟我类似，也是两个峰，只不过我们没有AKTA纯化仪，看不到电导的变化。看你发帖时间像是挺早啊，辛苦了！
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16楼2012-03-09 08:53:45
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baicai1487

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2012-03-09 03:14:19
注意下面图片左上角的注释，cond=电导，cond%=电导率，这两个是表示盐的，A280是用于测定蛋白质的。每两条竖直的红线是每一次脱盐洗脱的循环，那一次我一共做了很多次，用的是AKTA纯化仪，层析柱是GE的desalting， ...

您好！我脱盐的时候也出现了您这种情况，我把盐峰之前的峰和盐峰下面的峰都收集好了，做了电泳分析，发现盐峰下面的峰有蛋白的，很疑惑
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17楼2013-11-18 14:05:20
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
17楼: Originally posted by baicai1487 at 2013-11-18 14:05:20
您好！我脱盐的时候也出现了您这种情况，我把盐峰之前的峰和盐峰下面的峰都收集好了，做了电泳分析，发现盐峰下面的峰有蛋白的，很疑惑...

我也跑过，发现是没有的，因为时间比较久，图片已经没有了，但是对于我的酶来说，确实是全在第一个峰，也就是盐峰之前出来。我纯化了不同菌株来源的4个酶，都是这个情况，只是后面的3个酶测定了酶活力，确认了之后就没有跑胶，也没有图片给你看。建议你再规范地试一次，再作分析。我实在想不出为什么有的蛋白质会在盐峰之后出来。
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18楼2013-11-18 14:43:58
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baicai1487

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2013-11-18 14:43:58
我也跑过，发现是没有的，因为时间比较久，图片已经没有了，但是对于我的酶来说，确实是全在第一个峰，也就是盐峰之前出来。我纯化了不同菌株来源的4个酶，都是这个情况，只是后面的3个酶测定了酶活力，确认了之后 ...

高手，我能否问个问题，就是除完盐后的蛋白还稳定吗？就是蛋白水液了
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19楼2013-11-18 16:39:37
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
19楼: Originally posted by baicai1487 at 2013-11-18 16:39:37
高手，我能否问个问题，就是除完盐后的蛋白还稳定吗？就是蛋白水液了...

对于我的四个酶来说，稳定。
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20楼2013-11-18 17:13:54
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