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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于脱盐柱的问题
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amq7392

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 关于脱盐柱的问题

本人用 Sephadex G-25 Medium柱子脱盐，出来两个蛋白峰是怎么回事？所有的蛋白不是应该一起下来吗？所谓“盐峰”是什么？我要的产物在第一个峰，第二个峰活性很低。另外，请问脱盐的时候，用什么尺寸的柱子为好？是细长一些的还是粗短一些的？26X20cm柱子怎么样？我样品一般有十几毫升。
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1楼2012-03-05 15:46:49
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amq7392

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by baodongq at 2012-03-05 16:10:36:
当采用凝胶过滤层析进行拖延的时候，你所用的缓冲液、柱子的长短和上样量对你的脱盐效果会有很大的影响。凝胶柱最好选择细长一点的（26X60），样品量不要高于10%且浓度要高点。
你在脱盐的时候出现的两个峰，可能 ...

谢谢你！我的样品缓冲液是磷酸缓冲液，洗脱缓冲液用的Tris-HCl。缓冲液在280nm应该没有吸收的呀。
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4楼2012-03-05 16:19:10
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amq7392

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2012-03-05 22:37:24:
这个问题似乎我在哪个帖子里回答过了

谢谢，那么我搜搜你的帖子
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13楼2012-03-08 09:56:13
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amq7392

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2012-03-09 03:14:19:
注意下面图片左上角的注释，cond=电导，cond%=电导率，这两个是表示盐的，A280是用于测定蛋白质的。每两条竖直的红线是每一次脱盐洗脱的循环，那一次我一共做了很多次，用的是AKTA纯化仪，层析柱是GE的desalting ...

谢谢，我明白了，看你的图的情况跟我类似，也是两个峰，只不过我们没有AKTA纯化仪，看不到电导的变化。看你发帖时间像是挺早啊，辛苦了！
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16楼2012-03-09 08:53:45
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amq7392

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
30楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2013-11-23 14:54:19
你是提取什么样品的总蛋白质？这个样品具体怎样得来？怎样提取的？...

关于酶的动力学参数计算，请教酶兄一个问题，见贴：
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=6655688
望有空过去帮忙解答一下，谢谢！
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31楼2013-11-23 16:00:04
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