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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于脱盐柱的问题
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amq7392

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 关于脱盐柱的问题

本人用 Sephadex G-25 Medium柱子脱盐，出来两个蛋白峰是怎么回事？所有的蛋白不是应该一起下来吗？所谓“盐峰”是什么？我要的产物在第一个峰，第二个峰活性很低。另外，请问脱盐的时候，用什么尺寸的柱子为好？是细长一些的还是粗短一些的？26X20cm柱子怎么样？我样品一般有十几毫升。
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1楼 2012-03-05 15:46:49
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
17楼: Originally posted by baicai1487 at 2013-11-18 14:05:20
您好！我脱盐的时候也出现了您这种情况，我把盐峰之前的峰和盐峰下面的峰都收集好了，做了电泳分析，发现盐峰下面的峰有蛋白的，很疑惑...

我也跑过，发现是没有的，因为时间比较久，图片已经没有了，但是对于我的酶来说，确实是全在第一个峰，也就是盐峰之前出来。我纯化了不同菌株来源的4个酶，都是这个情况，只是后面的3个酶测定了酶活力，确认了之后就没有跑胶，也没有图片给你看。建议你再规范地试一次，再作分析。我实在想不出为什么有的蛋白质会在盐峰之后出来。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
18楼2013-11-18 14:43:58
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baodongq

禁虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking(金币+3): 很专业！ 2012-03-05 18:26:14
amq7392(金币+2): ★★★很有帮助 谢谢 2012-03-08 09:54:19
本帖内容被屏蔽
2楼2012-03-05 16:10:36
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baodongq

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
3楼2012-03-05 16:11:28
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amq7392

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by baodongq at 2012-03-05 16:10:36:
当采用凝胶过滤层析进行拖延的时候，你所用的缓冲液、柱子的长短和上样量对你的脱盐效果会有很大的影响。凝胶柱最好选择细长一点的（26X60），样品量不要高于10%且浓度要高点。
你在脱盐的时候出现的两个峰，可能 ...

谢谢你！我的样品缓冲液是磷酸缓冲液，洗脱缓冲液用的Tris-HCl。缓冲液在280nm应该没有吸收的呀。
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4楼2012-03-05 16:19:10
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